Анализ крови рпга и его расшифровка. Что показывает анализ крови рпга Рпга титр 1 20 что значит

Грамотно проведенный анализ крови помогает обнаружить возбудителей различных сложных заболеваний в организме на ранних стадиях их развития, а порой даже до проявления клинических симптомов болезни. Очень часто врачи назначают пациентам проведение анализа на реакцию агглютинации. Дальше мы разберемся с тем, что это — РПГА анализ крови, когда он применяется и о чем может поведать?

Принцип действия

Реакция непрямой гемагглютинации (называемая также реакцией пассивной гемагглютинации он же РПГА, РНГА) происходит в случае, когда на адсорбировавшие антиген эритроциты воздействуют иммунной сывороткой, которая соответствует данному антигену.

Исследованиями доказано, что по специфичности и чувствительности данный метод значительно превосходит остальные серологические анализы. Поэтому ее часто используют для выявления заболеваний, вызванных бактериями или риккетсиями. В качестве антигенов для такого анализа могут выступать бактериальные экстракты, очищенные антигены различных микробов, компоненты бактериальных вакцин.

После попадания болезнетворной бактерии в организм человека, в нем начинают продуцироваться специфические и неспецифические антитела, формируя определенный иммунный ответ. В случае с сифилисом, возбудителем которого считается бледная трепонема, принадлежащая к грамотрицательным спирохетам, в крови человека вырабатываются нетрепонемные или трепонемные антитела. На их выявлении основаны лабораторные диагностические исследования, которые должны подтвердить или опровергнуть наличие возбудителя вируса в организме.

При РПГА эритроциты, поверхность которых адсорбировала антигены бледной трепонемы, в случае добавления сыворотки с антителами к трепонеме из материала человека, зараженного сифилисом, склеиваются друг с другом, то есть происходит их агглютинация.

Достоверность исследования

Важно помнить, что антитела к бледной спирохете начинают появляться в организме инфицированных людей через 2-4 недели после заражения, а в некоторых случаях этот срок может растягиваться и до 6 недель.

По этой причине чувствительность анализа на РПГА на первичной стадии развития болезни составляет около 86%, что значительно уступает точности диагностики больных на двух следующих стадиях. Чувствительность анализа для таких пациентов, как и для носителей скрытого сифилиса, достигает 99-100%.

Однако реакция пассивной гемагглютинации имеет очень высокую специфичность, которая достигает уровня 96-100%.

Это дает возможность применять данное обследование для подтверждения диагноза в случае получения положительной реакции предварительного нетрепонемного исследования, например реакции микропреципитации РМП.

Учитывая, что чувствительность трепонемных анализов, включая РПГА, существенно превышает чувствительность нетрепонемных методов, такие обследования стали все чаще назначать при проведении скрининговых анализов на сифилис. Однако при получении положительной реакции скринингового исследования для уточнения диагноза птребуется провести еще один специфический (трепонемный) анализ, но не РПГА.

Расшифровка анализа

При добавлении сыворотки с антителами к трепонеме из материала человека, инфицированного сифилисом, к реагенту, с которым проводится исследование, происходит агглютинация эритроцитов, вследствие чего они выпадают в осадок.

На количество склеенных эритроцитов влияет уровень содержания антител в сыворотке. Поэтому пассивная гемагглютинация не только показывает присутствие антител, но и позволяет установить их количество. Результат исследования представлен уровнем титра антител.

Положительная реакция говорит о наличии возбудителя болезни в организме пациента. Однако в процессе проведения диагностики возможно появление ложноположительных реакций, количество которых статистически не превышает уровня 0,05-2,5% от общего числа исследований.

Положительная реакция РПГА у людей, не инфицированных сифилисом, может проявляться в случае наличия:

системных заболеваний соединительной ткани,
в крови пациента антител к возбудителям, похожим на бледную трепонему,
физиологических патологий, например инфаркта миокарда,
гепатита В или С,
онкологических заболеваний,
тифа, лептоспироза, туберкулеза,
ВИЧ-инфекции,
боррелиоза клещевой этиологии,
обширных травм или переломов,
беременности,
в случае проведения инъекций наркотических препаратов.

В большинстве случаев ложноположительные реакции сопровождаются низким титром. Высокие показатели титра типичны для вторичной стадии болезни и ранее скрытого сифилиса. Однако они могут появиться и при ложноположительной реакции у пациентов со злокачественными новообразованиями.

У людей, хотя бы однажды переболевших сифилисом, реакция РПГА до конца жизни остается положительной.

Редкими исключениями могут служить те ситуации, когда болезнь была выявлена на ранней стадии развития, после чего была проведена интенсивная и эффективная терапия. Поэтому анализ РПГА не может использоваться для оценки динамики выздоровления или сравнительной диагностики ранней или поздней стадий болезни.

При получении положительной реакции необходимо обследовать членов семьи заболевшего человека и людей, вступавших с ним в половой контакт.

Отрицательная реакция может быть получена в следующих случаях:

человек не болен сифилисом,
неправильно взята кровь для исследования,
после заражения прошло 2-4 недели, и выработка антител еще не началась.

В любом случае результат исследования необходимо оценивать в сочетании с дополнительными лабораторными и анамнестическими показателями.

Кому показан анализ?

Врач может направить сдавать кровь на РПГА пациентов в следующих случаях:

при наличии клинических проявлений сифилиса: язвенных высыпаний, увеличенных лимфоузлов, диффузной алопеции и других,
при подозрении на возможное инфицирование в случае контакта с уже заболевшими людьми,
доноров, желающих сдать кровь,
людей, проходящих ежегодные профилактические осмотры или оформляющих санитарные книжки,
пациентов с положительной реакцией скринингового теста,
перед госпитализацией в стационарное лечебное учреждение,
при предоперационном обследовании,
для выявления возбудителей сальмонеллеза, дифтерии, дизентерии методом проведения РПГА с соответствующим диагностикумом.

Порядок проведения исследования

На исследование отправляют сданный пациентом образец венозной крови. Для того, чтобы не получить ошибочное заключение, пациенту следует ответственно отнестись к подготовке к анализу. Чтобы результаты теста были достоверными, следует придерживаться таких рекомендаций:

Сдавать анализ следует только натощак.
В день проведения анализа можно пить минеральную воду без газа в минимальных количествах.
Как минимум 30 минут до проведения анализа нельзя курить, а лучше увеличить это время до нескольких часов.
Прямой запрет налагается на употребление алкогольных напитков.
Пациенты, которым необходимо регулярно применять какие-либо лекарственные препараты, обязательно должны проинформировать об этом врача, направляющего на обследование.
В случае недомогания или плохого самочувствия нужно поставить в известность медсестру, выполняющую забор крови, или врачу амбулатории, где нужно сдать анализ.

Отнеситесь ответственно не только к вопросу, где сдать анализ, но и к подготовке к обследованию.

Диагностика других инфекционных заболеваний

Не следует думать, что такое исследование, как РПГА может проводиться только для выявления в организме возбудителя сифилиса.

Анализ с сальмонеллезным диагностикумом позволяет выявить наличие инфекции в пищеварительной системе – сальмонеллы. Начиная с четвертого дня после заражения, организм продуцирует антитела к антигенам сальмонеллы, выявить которые помогает метод РПГА. Отрицательный результат говорит об отсутствии инфекции, а про ее наличие скажет положительный титр, нарастающий от 1:200 до 1:800 в острой фазе.

Метод проведения РПГА с дифтерийным маркером позволяет диагностировать дифтерию и оценить иммунитет после проведения вакцинации. Антитела начинают вырабатываться иммунной системой уже на следующий после заражения день, и остаются в организме на протяжении нескольких недель. Чувствительность данного анализа превосходит бактериологический метод исследования. Титр 1:80 подтверждает наличие дифтерии в организме.

Дизентерийный маркер при РПГА наиболее точно выявляет шигеллез (бактериальную дизентерию), даже по сравнению методом лабораторной диагностики посредством бактериального посева. Если больной не получает качественного лечения, то болезнь перетекает в хронический процесс, при котором часто случаются рецидивы. Анализ позволяет диагностировать острую и хроническую фазу диареи, выявить возбудителя дизентерии, отличить бактериальный шигеллез от колоректального рака, эндокринных нарушений или воспаления толстой кишки. Негативная реакция говорит об отсутствии бациллы, а подтверждает ее наличие титр 1:80 для малышей или 1:320 для взрослых.

Проведение исследование с коревым маркером позволяет определить заболевание корью. Такое обследование может стать альтернативой часто проводимому для диагностики кори анализу РТГА.

Итак, РПГА анализ крови – что же это? Подводя итоги, можно смело утверждать, что это современный, высокочувствительный и достоверный метод диагностики различных заболеваний бактериологической этиологии.

Вконтакте

Диагностика сифилиса – крайне важная задача для врачей-инфекционистов, поскольку для определения масштабов распространенности заболевания полное обследование пациентов не проводится. Это требует больших финансовых и временных затрат, к тому же клинические методы часто неинформативны. На сегодняшний день медицина располагает современными способами диагностики. На данный момент в лабораторной практике широко распространены так называемые экспресс-тесты, основанные на определении в крови сифилитических антител. К ним относятся РМП (реакция микропреципитации) и РПГА (реакция пассивной гемаглютинации).

Реакции на разных стадиях заболевания

Treponema pallidum - возбудитель сифилиса

Сифилис – длительно протекающее венерическое заболевание, характеризующееся стадийностью течения и способностью поражать абсолютно все органы и ткани человека. Возбудителем является микроорганизм Treponema pallidum – бледная трепонема.

Источник инфицирования – больной человек.

Исходя из путей заражения сифилисом (половой, контактно-бытовой, гемотрансфузионный, трансплантационный и трансплацентарный), экспресс-тесты могут быть назначены:

после случайного полового контакта с необследованным партнером;
если лечащему врачу становится известно о факте заражения кого-либо из членов семьи, полового партнера обследуемого человека;
если пациенту недавно проводились переливания цельной крови или пересадка органов;
в случае обнаружения возбудителя заболевания у родившей матери.

В соответствии с принципами действия, на которых основаны реакции пассивной гемагглютинации и микропреципитации, на каждой стадии течения сифилисаэ ффективным будет определенный тест.

Стадия	Описание	Изображение
Первичная	Основной диагностический критерий – наличие твердого шанкра. Он является своеобразным индикатором, позволяющим определить входные ворота инфекции. В случае, когда он возникает в области гениталий, следует судить о половом пути проникновения возбудителя в организм человека. Если твердый шанкр появляется на красной кайме губ – значит, был контакт между здоровым человеком и зараженным. Образование представляет собой безболезненный при пальпации воспалительный очаг (эрозия или язва), располагающийся на плотном основании. Твердые шанкры содержат большое количество бледных трепонем. 3-5 недель спустя в сыворотке крови возникают антитела – соединения плазмы крови белковой природы, препятствующие размножению микроорганизмов. Именно на определении в сыворотки крови специфических антител к сифилису построена большая часть экспресс-методов диагностики. Определение заболевания на первичной стадии развития проводится при помощи реакции микропреципитации	Твердый шанкр на языке, свидетельствующий о проникновении возбудителя через поцелуй - бытовой путь передачи
Вторичная	Характеризуется появлением «ожерелья Венеры», бледно-пятнистой сыпи, возникающей вследствие генерализованного поражения кожных покровов и слизистых оболочек. Возможна локальная потеря волос, вплоть до облысения. На данной стадии болезни пациенты нередко предъявляют жалобы на легкое недомогание, повышение температуры тела до 37,7 °C, появление слабости, насморка, кашля или конъюнктивита. Довольно часто «ожерелья Венеры» нет, а вторичный сифилис практически никак себя не проявляет, способствуя переходу в следующую, хроническую стадию. Серологические реакции также положительны. Для определения заболевания на данном этапе применяется как РМП, так и РПГА	"Ожерелье Венеры"
Третичная	Является самой тяжелой стадией, склонной к рецидивам с длительным течением на протяжении многих лет. Для данного периода характерно развитие гумм – сифилитических гранулем, склонных к некрозу и грубому рубцеванию. Гуммы способны образовываться в любых тканях и органах, в том числе внутренних. Трепонемы обнаруживаются не всегда – серологические реакции положительны примерно в 70% случаев. Наиболее однозначный ответ о наличии антител дает реакция прямой гемагглютинации

Анализ крови на сифилис - реакция Вассермана

РПГА

Реакция пассивной гемаглютинации - один из наиболее специфических и чувствительных серологических методов диагностики сифилиса.

Оценка результата РПГА

Основные характеристики и особенности проведения РПГА указаны в таблице.

Характеристика	Описание
Материал исследования	Образец венозной крови
Механизм действия	Реакция непрямой гемагглютинации развивается в случае, если эритроциты – красные кровяные клетки, на поверхности которых располагаются антигены бледной трепонемы, склеиваются при контакте сыворотки крови зараженного сифилисом человека
Эффективность	Исследованиями доказано, что по специфичности и чувствительности реакции к возбудителю заболевания данный метод является одним из самых точных серологических анализов
	При добавлении к исследуемому биологическому материалу сыворотки с антителами к трепонеме наблюдается агглютинация (склеивание) эритроцитов, выпадающих в осадок в виде зонтика. Также на количество агглютинированных эритроцитов влияет концентрация сывороточных антител. Положительная реакция РПГА свидетельствует о присутствии Treponema pallidum в крови обследуемого
Показания для проведения исследования	Лечащий врач назначает сдачу анализа крови на РПГА в следующих случаях: клинические проявления сифилиса (твердый шанкр, «ожерелье Венеры», гуммы и т. д.); отсутствие клинических проявлений, но возможное инфицирование вследствие контакта с больным человеком; подготовка к донорской сдаче крови; возникновение необходимости прохождения обследования для оформления или продления медицинских книжек; дообследование пациентов с положительной реакцией скринингового теста; госпитализация пациента в стационар и предоперационное обследование
Чувствительность	на стадии первичного сифилиса порядка 80%; вторичного и третичного – 90-98%
Специфичность	Высокая специфичность (98-100%) дает возможность назначать анализ для подтверждения сифилиса в случае положительной реакции микропреципитации или других аналогичных обследований
Ложные результаты	Частота ложноположительных результатов относительно невелика и по данным различных исследователей составляет порядка 0,05-2,5%. Возникновение ложноположительных результатов у лиц, не инфицированных сифилисом, связано со следующими факторами: наличие системных заболеваний соединительной ткани; аналогичные бледной трепонеме возбудители в сыворотке пациента; соматические заболевания (инфаркт миокарда, гепатиты различной этиологии и пр.); ВИЧ-инфекция; обширные травмы и переломы; беременность; инъекционный прием наркотических средств; онкопатологии и др.
Отрицательный результат	Может быть получен в случае, если: человек здоров; анализ проведен некорректно; анализ проведен в течение первых 2-4 недель, когда антитела не определяются

Если человек хотя бы раз был болен сифилисом, реакция РПГА будет оставаться положительной в течение всей его жизни.

Для того, чтобы избежать ложноположительных результатов, нужно придерживаться следующих рекомендаций при подготовке к сдаче анализа:

забор материала проводится строго натощак;
в день сдачи крови разрешается пить негазированную минеральную воду в минимальном объеме;
перед проведением анализа на несколько часов следует отказаться от курения и полностью исключить прием алкогольных напитков;
в случае, если пациент принимает лекарственные препараты, ему надо уведомить об этом своего лечащего врача.

При получении положительного результата показано немедленное обследование членов семьи и половых партнеров инфицированных лиц с целью предотвращения дальнейшего распространения инфекции.

РМП

Реакция микропреципитации (РМП) различной интенсивности

С помощью анализа под названием реакция микропреципитации (РМП) специалист определяет антитела, образующиеся на стадии первичного сифилиса. Титр антител к инфекции выявляется в крови больного уже на 7-10 день после возникновения твердого шанкра.

Характеристики и особенности проведения РМП указаны в таблице.

Критерий	Описание
Материал для обследования	Сыворотка крови, соскоб с поверхностей язв и эрозий, жидкость из лимфоузлов
Чувствительность	Колеблется в диапазоне 80-95%, зависит также от стадии заболевания
Расшифровка и положительный результат	К исследуемому образцу крови добавляют антиген - фосфолипид кардиолипин, получаемый из бычьего сердца. Сифилис-неспецифические антитела образуют реакцию с липидом. Положительный результат свидетельствует о наличии Treponema Pallidum или сходных возбудителей в исследуемом материале. Интенсивность проведенной реакции (от 1 до 4) указывает на степень заражения
Эффективность	Преимущество метода РМП в том, что он позволяет диагностировать сифилис на начальном этапе инфицирования
Показания для назначения исследования	Анализ сдают в следующих случаях: поступление больного в стационар; предоперационное обследование; анализ крови будущих доноров, беременных; подозрение на сифилис; контроль проведенной медикаментозной терапии; ребенок рожден от матери, инфицированной сифилисом
Ложноположительный результат	Возникновение ложноположительных результатов возможно в следующих случаях: сахарный диабет; ВИЧ-инфекция и СПИД; вирусные гепатиты; другие инфекционные заболевания; иногда беременность
Отрицательный результат	Свидетельствует об отсутствии заболевания, либо возможен в первые несколько дней, когда титра антител еще нет

Так же, как и в случае РПГА, для исключения ложноположительных результатов, перед тем как сдать анализ, необходимо:

перед забором крови рекомендуется пить строго негазированную, несладкую воду;
накануне сдачи анализа исключить употребление жирной, острой и жареной пищи;
ни в коем случае не употреблять алкоголь;
избегать повышенных физических и эмоциональных нагрузок;
при наличии лекарственного средства, которое пациент вынужден принимать в связи с какой-либо терапией, следует предупредить врача, направившего на данное обследование.

Реакция микропреципитации – один из первых анализов, назначаемых для диагностики заболевания. Для получения более точных данных назначается аналогичное исследование, например, РПГА.

В любом случае расшифровка анализов оценивается в сочетании с результатами основного клинического обследования.

РПГА является одним из самых значимых анализов крови. Он позволяет выявить сифилис на любых стадиях, а также ряд других заболеваний. Этот анализ считается одним из самых точных методов выявления возбудителей сифилиса. В каких случаях пациента могут отправить на обследование и что значат результаты?

Что такое РПГА

РПГА является реакцией пассивной гемагглютинации, а если точнее - анализом для выявления этого процесса. В ходе исследования легко можно обнаружить антигены бледной трепонемы, именно этот микроорганизм провоцирует сифилис. Если человек полностью здоров, бледная трепонема, попав в организм, провоцирует ответную реакцию со стороны иммунной системы - выработку особых антител. По их наличию и определяется, есть заболевание или нет.

Все лабораторные исследования на сифилис делятся на два типа:

специфические;
неспецифические.

Всё зависит от того, какие именно антитела присутствуют в крови. РПГА относят к специфическому типу анализа для выявления возбудителей сифилиса. Впервые такие исследования стали проводить в 1965 году, РПГА оказался настолько точным анализом, что быстро стал наиболее популярным среди остальных методик диагностики сифилиса. Исследование позволяет выявить болезнь на любой стадии, включая латентную.

Однако в некоторых случаях РПГА может дать ложную положительную реакцию. Это может случиться из-за наличия некоторых вирусных заболеваний или при сниженном иммунитете после какой-либо болезни.

Насколько анализ достоверен?

Если человек заразился сифилисом, выявить болезнь можно не ранее чем через 2-4 недели - только на этом сроке начинают вырабатываться антитела к возбудителю. Иногда инкубационный период может длиться более месяца. РПГА, анализ крови, при ранней диагностике имеет точность 86%. Начальная стадия заболевания самая «неуловимая» для этого типа исследования. А вот на следующих стадиях сифилиса и у носителей латентного вируса, точность диагностики повышается до 99-100%.

Это позволяет применять РПГА как дополнительное исследование для подтверждения уже имеющегося диагноза или при положительных результатах других анализов (нетрепонемного типа). РПГА всё чаще используют для скрининга, но при положительных результатах так или иначе проводят ещё одно специфическое исследование.

Кто в зоне риска

Для проведения РПГА требуется направление от врача. Направить пациента на анализ могут в нескольких случаях:

Если имеются видимые признаки болезни. Сюда относятся язвы на коже, увеличенные лимфоузлы, частичное облысение волосяного покрова и пр.
Если у пациента был прямой контакт с больными сифилисом, для профилактики ему также необходимо пройти обследование.
Все доноры, сдающие кровь, обязаны проверяться на сифилис перед процедурой.
Для оформления санитарной книжки или ежегодных профосмотров на предприятиях также потребуется пройти необходимые обследования.
Если скрининг дал положительный результат.
На сифилис проверяют каждого, кого готовят к госпитализации в стационар.
Обследование пациента перед любой операцией также требует прохождения обследования.

Врач может назначить РПГА не только при подозрении на сифилис или для планового осмотра, но и для диагностики следующих заболеваний:

дифтерии;
дизентерии;
сальмонеллеза.

Как проводится анализ

Для проведения РПГА берётся кровь из вены, полученный образец отправляют на исследование. Чтобы результаты были максимально точны и не искажены, важно правильно подготовиться к процедуре. Чтобы не пришлось сдавать кровь заново, необходимо руководствоваться следующими правилами перед визитом к специалисту:

Кровь сдаётся ранним утром до 8-10 часов.
Нельзя завтракать, пить чай или кофе, допустимо только употребление небольшого количества воды. Желательно, чтобы последний приём пищи был за 10-12 часов до анализа.
Хотя бы за полчаса до обследования нельзя курить, но лучше всего сделать перерыв между сигаретами в 4-6 часов.
В день анализа и минимум за сутки до него нельзя пить алкогольные напитки любой крепости.
Если есть необходимость по графику принимать лекарства, об этом обязательно нужно сказать врачу, если нет возможности немного перенести это по времен.
При плохом самочувствии или слабости нужно обязательно предупредить медсестру, которая забирает кровь для анализа, или врача.

Кровь из вены на РПГА

К подготовке важно относиться ответственно, поскольку от результатов анализа зависит многое, в особенности точная постановка диагноза.

Ошибки в диагностике и назначение неверного лечения могут привести к плачевным последствиям.

Когда ждать результатов

Чтобы РПГА анализ дал наконец положительную или отрицательную реакцию на сифилис, должно пройти определённое время. Положительная реакция может проявиться через месяц после заражения, однако на первичной стадии показатели титров одни из самых низких - менее 1:320. На вторичной стадии показатели увеличиваются, а вот при латентном сифилисе анализы будут такими же, как и в самом начале развития заболевания.

Когда точно определена стадия сифилиса, назначается лечение в виде курса препаратов. Но даже после излечения от заболевания, анализы РПГА могут давать положительные результаты на сифилис. Это случается в большинстве случаев, положительный анализ у людей, вылечившихся от сифилиса, может быть в течение всей оставшейся жизни.

Есть случаи, когда положительные реакции на сифилис вызваны совершенно иными причинами. Такие результаты анализа называют ложноположительными, чаще всего такие реакции бывают:

у беременных;
во время менструации;
если недавно была вакцинация;
если был инфаркт миокарда незадолго до обследования;
при инфекционных заболеваниях (оспа, грипп, ОРВИ, ВИЧ, гепатит (вирусный) и пр.);
при онкологии;
при ослаблении иммунитета;
у больных с патологиями внутренних органов.

Исследование РПГА для диагностики других инфекций

Реакция РПГА позволяет выявить не только сифилис, но и ряд других инфекционных заболеваний. Сдавать кровь понадобится, например, людям с подозрениями на острую кишечную инфекцию (сальмонеллез).

Болезнь провоцируют сальмонеллы, попадающие в организм человека. По мере развития сальмонеллеза постепенно разрушается структура ЖКТ, а также происходит сильная интоксикация. Основными симптомами кишечной инфекцией являются:

рвота;
диарея;
изменение запаха стула, а также появление в нём слизи или кровавых выделений;
боль в животе;
высокая температура;
озноб;
плохое самочувствие;
обезвоживание и пр.

Ещё одним заболеванием, для выявления которого можно применять РПГА, является корь. Она характеризуется поражениями слизистых глаза, ротовой полости и дыхательных путей. Кроме этого явными признаками болезни является сыпь на всём теле пациента, а также сильная интоксикация. Последняя сопровождается рвотой, нарушениями стула, нарушением водного баланса в организме и пр.

Исследование РПГА также может выявить столбняк, который является острой инфекцией.

Возбудитель этого заболевания легко проникает в организм через царапины, раны, порезы, ожоги и пр. Также можно заразиться столбняком, если в больницах или при косметических процедурах использовались нестерильные инструменты и материалы. Главными симптомами, по которым можно выявить столбняк, являются:

тонус мышц;
слабость;
раздражительность;
плохой аппетит;
апатия;
судороги в мышцах лица;
если столбняк следствие травмы, может ощущаться тянущая вокруг повреждённого участка тела;
затрудняется глотание воды и пищи.

Исследование РПГА также применяется для выявления коклюша на любой стадии. Это очень важно, поскольку на начальной стадии заболевания нет чётких симптомов, позволяющих его диагностировать. Подозрения на инфекцию чаще всего появляются уже на более поздних стадиях.

При коклюше может быть повышенная температура, однако точно так же она может оставаться в пределах нормы и не превышать стандартные 36,6. Позже у больного появляется кашель, приступы которого постепенно становятся всё чаще и сильнее.

Итак, реакция пассивной гемагглютинации является крайне эффективным методом диагностики сифилиса. Несмотря на то, что чаще всего РПГА используют для выявления антител бледной трепонемы, с помощью этого анализа можно установить наличие и других инфекций - кори, коклюша, сальмонеллеза и пр. Чтобы результаты исследования были максимально чёткими, важно правильно к ним готовиться и соблюдать все необходимые условия.

Анализ крови РПГА - одно из важнейших исследований, которое помогает определить наличие патогенных возбудителей в организме.

Метод РПГА очень часто используется при подозрении на сифилис, инфицирование кишечного тракта, коклюш и другие опасные патологии. Когда выписывается направление на подобное исследование, пациенты интересуются, как сдают биоматериал и насколько достоверные результаты дает методика. Об этом и пойдет речь далее.

Что такое РПГА и какие имеет особенности

Далеко не каждый человек знает, что это такое и как расшифровывается аббревиатура РПГА. Под этим сокращением подразумевается реакция пассивной гемагглютинации, методика нужна для определения патогенного процесса в организме.

Этот тест выявляет антигены бледной трепонемы (люис) - патогенного микроорганизма, провоцирующего возникновение сифилиса. Если обследуемый здоров и не страдает от каких-либо хронических заболеваний, при попадании в организм бледной трепонемы иммунитет начинает активно вырабатывать антитела.

Наличие в исследуемом биоматериале антител бледной трепонемы - основание для диагностирования сифилиса.

Условно тестирование на сифилис можно разделить на 2 вида:

специфическое;
неспецифическое.

Классификация анализа на категории зависит от вида антител, обнаруженных в полученном образце крови. Несмотря на то что впервые такой метод диагностики был проведен в 1965 году, тестирование оказалось настолько эффективным и результативным, что сегодня оно до сих пор не теряет актуальности.

Несомненным достоинством диагностики является то, что она позволяет обнаружить инфекцию на любом этапе развития, в том числе в латентной стадии.

Показания к проведению

Врачи советуют сдать анализ РПГА в следующих случаях:

у пациента проявляются клинические симптомы сифилиса (появление эрозий, язв, увеличение лимфоузлов) и регионарной лимфаденопатии; в этом случае РПГА на сифилис является незаменимым тестом, поскольку позволяет выявить болезнь на первичной, вторичной и третичной стадии;
возникновение признаков очаговой или диффузной алопеции;
если человек имел половой контакт с носителем сифилиса;
человек хочет стать донором, сдавать кровь и плазму;
РПГА входит в ежегодное профилактическое обследование, которое назначается работникам разных госучреждений;
при оформлении медицинской книжки;
при госпитализации.

Какие заболевания можно выявить в ходе диагностики

Чаще всего положительный результат теста свидетельствует о наличии сифилиса (в 70% случаев) — как врожденного, так и приобретенного, а также может говорить о таких патологиях:

ВИЧ-инфекция;
разные формы гепатита;
недавно перенесенный инфаркт миокарда;
возвратный тиф;
туберкулез;
наличие венерических заболеваний;
клещевой боррелиоз;
дифтерия;
диффузные заболевания соединительной ткани;
злоупотребление наркотическими веществами (вводимыми путем инъекций);
наличие воспалительного процесса в ротовой полости или в районе гениталий;
формирование новообразований злокачественной природы;
инфекционный мононуклеоз.

Чтобы получить достоверные сведения, сдавать кровь нужно с учетом всех врачебных рекомендаций, в противном случае возбудитель сифилиса может быть не выявлен.

Почему для диагностики сифилиса назначается именно РПГА

Часто пациенты задаются вопросом, почему при подозрении на сифилис назначают именно РПГА. Специалисты уверяют, что тестирование является столь популярным, поскольку в 99% случаев дает правильный результат.

Реакция агглютинации не произойдет, только если в организме отсутствуют антитела трепонемы, в противном случае обследование обязательно покажет их присутствие.

Медицинская практика показывает, что чувствительность теста очень высока, причем положительная реакция будет выявлена даже при скрытых стадиях заболевания. Благодаря высокой результативности тест не теряет актуальности даже в настоящее время.

Использование РПГА при других патологиях

Сдачу биоматериала на данное исследование часто назначают при подозрении на коклюш, на брюшной тиф, на иерсиниоз (острое инфекционное заболевание ЖКТ). Такая востребованность обусловлена тем, что по чувствительности и результативности РПГА превосходит практически все серологические анализы.

Тест помогает определить большую часть недугов, вызванных патогенными клетками и риккетсиями. При этом в роли антигенов можно использовать ингредиенты бактериальных вакцин, бактериальные экстракты (с коревым или коклюшным диагностикумом), очищенные антигены всевозможных микроорганизмов.

Основные преимущества метода

Данная методика активно используется по всему миру не только потому, что она является очень результативной, но и из-за определенных преимуществ:

проведение теста не представляет сложности, от пациента требуется лишь сдать кровь;
для проведения исследования не нужно специальное оборудование;
исследование не занимает много времени, обычно пациенту оглашают результат в течение 24 часов;
тест имеет высокую чувствительность и специфичность к сифилису.

Особенности проведения

Для осуществления тестирование требуется венозная кровь. Чтобы расшифровка была достоверной, пациенту необходимо ответственно подойти к подготовке к анализу и строго соблюдать врачебные советы.

сдавать биологический материал разрешено только на пустой желудок;
перед мероприятием (если сдача крови осуществляется днем или вечером) разрешено пить только минеральную воду без газов, употреблять жидкость нужно в небольших объемах;
за пару часов до сдачи биоматериала запрещено курить;
категорически запрещено употреблять спиртные напитки за двое суток до процедуры;
если пациент принимает какие-либо лечебные препараты, об этом непременно нужно предупредить лечащего врача;
если человек чувствует себя плохо, забор крови лучше перенести на другой день, поскольку это может негативно сказаться на расшифровке результата.

Важнейшим этапом является подбор подходящей клиники. Кровь лучше сдавать в современном диагностическом центре с хорошей репутацией.

Как долго проводится анализ?

Точно сказать, как долго делается расшифровка результатов, невозможно. Скорость ее зависит от самого типа исследования, а также от применяемого оборудования.

Чаще всего РПГА расшифровывается в течение суток, но в некоторых случаях процедура может занять от 2 до 4 дней. Если лаборатория будет сильно загружена, пациенту выдадут бланк с результатами не раньше чем через 5 суток.

Расшифровка результатов

Чтобы выявить наличие патологии, к полученной крови нужно добавить специальную сыворотку. Если в организме человека присутствуют трепонемы, произойдет реакция агглютинации, вследствие чего эритроциты выпадут в осадок.

Число склеенных эритроцитов во многом зависит от того, какое количество антител присутствует в реагенте. Пассивная гемагглютинация показывает не только присутствие антител, но также дает медику возможность определить их количество.

Положительный результат

Если тест показывает положительную реакцию, это свидетельствует о присутствии возбудителя болезни. Чтобы поставить более точный диагноз, пациента нужно направить на дополнительную лабораторную и инструментальную диагностику.

Неотъемлемым этапом обследование является проверка всех членов семьи и людей, с которыми инфицированный человек вступал в половой контакт.

Как показывает медицинская практика, примерно у 5% пациентов в ходе тестирования проявляется ложноположительная реакция, что может произойти при игнорировании подготовительного этапа, а также при:

формировании онкологических новообразований;
патологии соединительной ткани;
наличии гепатита разных форм;
ВИЧ-инфекции.

Также слабоположительный результат может проявиться при беременности. Ложная “+” реакция практически всегда сопровождается низким титром. Интересным моментом является то, что если человек хотя бы раз болел сифилисом, реакция РПГА всегда будет положительной.

Исключение составляют только те случаи, когда сифилис был выявлен на ранней стадии и после этого сразу началась интенсивная терапия.

Отрицательный результат

Тестирование дает отрицательный ответ в таких случаях:

у пациента в организме отсутствуют патогенные микроорганизмы, являющиеся возбудителем сифилиса;
с момента заражения прошло менее 3 недель, и иммунитет еще не начал производить антитела;
забор крови из вены производился неправильно.

Даже если тестирование показало “-”, специалисты все же рекомендуют пройти дополнительные анализы для подстраховки, чтобы убедиться, что патогенные микроорганизмы отсутствуют.

Точность результата

Многочисленные клинические исследования подтвердили, что такое эта методика дает гарантированно правильный результат, если анализ проводился при соблюдении всех правил и пациент строго придерживался врачебных рекомендаций перед забором крови.

Если тестирование дало положительный ответ, вероятность того, что человек инфицирован сифилисом, составляет более 95% .

Неправильная реакция может проявиться только в тех случаях, если с момента инфицирования прошло слишком мало времени либо лаборант не соблюдал инструкцию при исследовании.

Что касается ложноположительного результата, то он может быть, если диагностика проводилась при наличии инфекционных заболеваний или патологических состояний.

Ложный результат отличается от истинного положительного тем, что он очень быстро становится отрицательным, если тестирование провести повторно через 2 недели.

На данный момент анализ РПГА до сих пор остается самым эффективным и достоверным тестом определения сифилиса и прочих опасных патологий. Поэтому при подозрении на наличие многих заболеваний первым делом медики направляют пациента на РПГА.

Сифилис – заболевание инфекционной природы, обусловленное спирохетой Treponema pallidum, склонное к прогредиентному хроническому течению, с чёткой периодизацией клинической симптоматики.

Преобладание полового пути передачи над контактным и трансплацентарным ставит это заболевание в ряд венерических (ЗППП, ИППП). Помимо указанных способов передачи инфекции особую роль играет артифициальный путь (от лат. «artificio» - искусственно созданный).

Он характерен для медицинских учреждений, в основном, реализуется в условиях стационара. Инфицирование происходит при гемотрансфузиях, различных хирургических операциях, инвазивных диагностических методах.

Несмотря на карантинизацию донорской крови, проблема выявления сифилиса у доноров на разных стадиях заболевания все ещё актуальна.

Поэтому диагностические мероприятия при сифилисе требуют стандартизации, внедрения новых чувствительных и информативных методов идентификации, а также сведения к минимуму ошибок и неправильной трактовки результатов анализов.

Показать всё

1. Классификация методов лабораторной диагностики

Диагностика сифилиса имеет некоторые особенности и отличается от диагностики других бактериальных инфекций. Сложное строение и антигенные свойства бледной трепонемы обусловливают ошибки в интерпретации результатов серологических реакций.

Сдать анализ крови на сифилис предлагают 3 основным группам пациентов:

1 Скрининг и диспансеризация групп населения (в том числе и беременность, постановка на учет в женской консультации, поступление на работу и оформление медкнижки и так далее).
2 Скрининг в группах риска (незащищенные половые контакты с человеком, инфицированным сифилисом, лица после принудительных сексуальных контактов, ВИЧ-инфицированные и так далее).
3 Лица, имеющие симптомы заболевания, или лица с подозрением на сифилитическую инфекцию.

Все лабораторные методы условно подразделяют на прямые и непрямые.

1.1. Прямые методы

1 Идентификация Treponema pallidum в тёмном поле (темнопольная микроскопия).
2 Заражение подопытных животных (культивирование в лабораторных животных).
3 ПЦР (полимеразно-цепная реакция).
4 ДНК-зонд или гибридизация нуклеиновых кислот.

1.2. Непрямые методы

Серологические реакции - это методы лабораторной диагностики, базирующиеся на обнаружении антител (сокращенно АТ) к антигенам бледной трепонемы (сокращенно АГ). Они имеют основное значение для подтверждения диагноза.

1 Нетрепонемные тесты:
- Реакция Вассермана (РСК);
- Реакция микропреципитации (МР, РМП) и ее аналоги, которые приведены ниже;
- Тест быстрых плазменных реагинов (RPR, РПР);
- Тест с красным толуидином и сывороткой (TRUST);
- Нетрепонемный тест Лаборатории исследования венерических болезней - VDRL.
2 Трепонемные тесты:
- Р-ция иммобилизации Treponema pallidum – РИБТ/РИТ;
- Р-ция иммунофлюоресценции – РИФ, FTA (разведения сывороток РИФ-10, РИФ-200, РИФ-абс);
- Р-ция пассивной гемагглютинации (РПГА, ТРПГА, TPHA);
- Иммуноферментный анализ (ИФА, EIA);
- Иммуноблоттинг.

Рисунок 1 - Алгоритм серодиагностики сифилиса

1.3. Гистоморфологические методы

Эти методы сводятся к выявлению особенностей гистоморфологии сифилитических проявлений. Внимание уделяется тонкостям строения твёрдого шанкра. Однако, дифференциальная диагностика инфекции с помощью гистологии весьма затруднительна. Гистоморфология используется с другими лабораторными и клиническими тестами.

2. Микроскопия Treponema pallidum в тёмном поле

Этот метод основывается на непосредственном обнаружении бледной трепонемы в исследуемом материале с помощью микроскопа и специальных приспособлений (чаще всего отделяемое эрозий и язв, реже спинномозговая жидкость и другие субстраты).

С помощью скарификации, соскоба, сдавливания с эрозий и язвенных дефектов получают экссудат, затем исследуют в микроскоп подготовленный препарат.

Обычно бледные трепонемы выявляют в препарате, полученном из шанкра, из очагов вторичного свежего, вторичного рецидивного сифилиса, а также пунктата лимфоузлов, плаценты.

Основанный на феномене свечения мелких частиц в тёмном поле при попадании луча света (феномен Тиндаля), метод прекрасно позволяет дифференцировать возбудителя сифилиса от других трепонем на основании морфологических отличий и отличий в способах передвижения бактерии.

Для микроскопии используют специальный темнопольный конденсор соответствующего оптического разрешения. Препарат получают способом раздавленной капли (каплю материала наносят на чистое обезжиренное предметное стекло и закрывают очень тонким покровным).

На покровное стекло капают иммерсионное масло. С помощью поворота тубуса и поворота увеличивающей линзы регулируют нужное освещение.

В тёмном поле микроскопа обнаруживаются клетки крови, эпителиальные клетки и сам возбудитель сифилиса. Бледная трепонема выглядит как спираль, очень тонкая, излучающая серебристый цвет, с плавными движениями.

Рисунок 2 - Темнопольная микроскопия как способ визуализации бледной трепонемы в исследуемом материале. Источник иллюстрации - CDC

Treponema pallidum необходимо отличать от других трепонем, в том числе и Tr. refringens, которая может содержаться в ротоглотке и на слизистой половых органов. Эта бактерия совершает хаотичные движения, имеет широкие и несимметричные, довольно грубые завитки. Кроме того, Treponema pallidum отличают от Tr. Microdentium, Tr. Buccalis и Tr. vincenti.

Визуализация бактерий в тёмном поле иногда дополняется реакцией флюоресценции. Для этого меченые флюоресцирующим красителем противотрепонемные АТ добавляют в нативный материал. При этом образуется комплекс, называемый антиген-антитело (сокращенно АГ-АТ), который и является объектом для исследования с помощью люминесцентного микроскопа.

3. Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР)

ПЦР, разработанная в 1991 году для обнаружения молекулы дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) бледной трепонемы, является высокочувствительным и специфичным, позволяет выявить фрагменты ДНК возбудителя.

Базируется данный анализ на копировании коротких участков ДНК бледной спирохеты, который удовлетворяет заданным параметрам и присутствует в образце. Всё это выполняется в искусственных условиях (in vitro). Реакция проводится в приборе - амплификаторе, который обеспечивает периодизацию температурных циклов. Происходит охлаждение с последующим нагреванием пробирок с погрешностью в 0,1˚С.

ДНК-матрицу прогревают в течение 2 минут при температуре 92-98˚С (максимальная температура используется, если полимераза термостабильна). При нагревании цепи ДНК расходятся из-за распада водородных связей между ними. В стадии отжига температуру реакции снижают для связывания праймера с одноцепочечной матрицей.

Отжиг занимает около 30 секунд, в течение этого времени синтезируются сотни нуклеотидов. Вновь синтезируемые молекулы копируются полимеразой, в результате многократно увеличиваются специфические фрагменты дезоксирибонуклеиновой кислоты. Последующая детекция фрагментов проводится с помощью электрофореза в геле агар.

ПЦР-диагностика сифилиса пока носит экспериментальный характер, но оправдана при выявлении врождённой инфекции, в сложных диагностических случаях или при минимальном содержании бледных трепонем в исследуемом материале.

4. ДНК-гибридизация

ДНК-гибридизация выполняется in vitro и основана на полном или частичном соединении двух одноцепочечных молекул ДНК в одну молекулу. В случае полного соответствия комплементарных фрагментов объединение происходит легко. Если комплементарное соответствие частичное, то объединение цепочек ДНК происходит медленно. На основании времени слияния цепей можно оценить степень комплементарности.

При нагреве ДНК в буферном растворе разрываются водородные связи азотистыми основаниями, являющимися комплементарными, в результате цепочки ДНК расходятся. Далее получают препарат из двух денатурированных дезоксирибонуклеиновых кислот. При охлаждении одноцепочечные участки ренатурируют. Образуется так называемый гибрид ДНК.

Метод позволяет оценить и анализировать скорость отжига, учитывая особенности (сходства и различия) ДНК между видами или внутри вида.

Применение ДНК-зонда заключается в гибридизации меченого фрагмента ДНК со специфичным участком ДНК для идентификации комплементарных последовательностей нуклеотидов. Для метки зонда используется группа ненасыщенных атомов (хромофоры) или радиоактивные изотопы.

ДНК–зонд применяют для гетерогенного и гомогенного детектирования нуклеиновых кислот. Роль зонда заключается в определении участков, на которых произошло слияние мишень-зонд. Детектирование в гомогенной системе имеет преимущество - позволяет отследить гибридизацию молекул ДНК в реальном времени.

Суть метода сводится в денатурации ДНК и ренатурации (воссоединения цепочек ДНК). Процесс ренатурации нуклеиновой кислоты и ДНК-зонда заканчивается образованием «гибрида».

Специфические последовательности нуклеиновых кислот гибридизуются с ДНК–зондом и, таким образом, выявляются и позволяют оценить количество ДНК в исследуемом материале.

5. Заражение лабораторных животных

Высокая чувствительность кроликов к Treponema pallidum (порядка 99,9%) позволяет применять их в диагностике сифилитической инфекции.

Заражение кроликов проводится в научно-исследовательских центрах и является «золотым стандартом» оценки чувствительности других методов.

Вернёмся к трепонемным и нетрепонемным тестам, так как они используются чаще всего. Рассмотрим их преимущества и недостатки, а также ошибки в интерпретации результатов.

6. Нетрепонемные тесты

Это тесты определения антител IgG и IgM к стандартизированному кардиолипиновому антигену. Их существенным недостатком является сравнительно небольшая специфичность.

Низкая стоимость и простота выполнения позволяют отнести эти тесты к отборочным диагностическим, необходимым для установки предварительного диагноза и скрининга среди населения.

Именно нетрепонемные тесты сдаются при оформлении медицинской книжки, устройстве на работу, постановке на учет в женской консультации.

Недостатки:

1 Минимальная чувствительность в стадии сифилиса первичного – 70%;
2 Минимальная чувствительность в стадии сифилиса позднего – 30%;
3 Возможность появления ложноотрицательных и ложноположительных результатов;
4 Трудоёмкость выполнения РСК.

Преимущества:

1 Относительно маленькая стоимость производства тестов;
2 Получение быстрого ответа;
3 Возможность их применения для скрининга.

Получение ложноположительных или слабоположительных проб возможно в следующих случаях:

1 Нарушение технологии выполнения, при блокировании комплекса АГ-АТ.
2 Наличие у больного аутоиммунных заболеваний (ревматоидный артирит, ревматизм, склеродермия, системная красная волчанка, саркоидоз и др.).
3 Злокачественные новообразования.
4 Вирусные и бактериальные инфекции.
5 Эндокринные заболевания (аутоиммунный тиреоидит, сахарный диабет).
6 Беременность.
7 Употребление алкоголя.
8 Приём жирной пищи.
9 Старческий возраст.

Как видно из списка, существует достаточно причин для неверного результата. Поэтому к нему следует весьма настороженно относиться. Рассмотрим наряду с РСК ещё две пробы. Это реакция микропреципитации и VDLR (ее модификация).

7. Реакция связывания комплемента (РСК, Вассермана, RW)

Это проба, основанная на способности комплемента связываться с комплексами АГ-АТ. Идентифицируют образовавшийся комплекс с помощью гемолитической системы. Кардиолипиновый антиген заметно повышает чувствительность пробы.

Чувствительной является и реакция Колмера, которая заключается в выполнении при различных температурных режимах. Так, первая фаза реакции Колмера протекает при температуре 20˚С в течение получаса, вторая фаза при тепературе 4-8˚С на протяжении 20-ти часов. За это время происходит связывание комплемента.

При выполнении РСК возможно получение резко положительных результатов. Причиной, вероятно, является большой титр антител в неразведенной сыворотке. В этом случае пробы ставят с уменьшающими дозами.

Для дифференцировки стадий сифилиса и оценки эффективности противосифилитического лечения определяют количество АТ в сыворотке.

Позитивность пробы оценивают с помощью крестов, также в реакциях Вассермана, Колмера и Канна указывается разведение сыворотки.

8. Реакция микропреципитации

Так как трудоёмкость выполнения вышеуказанных проб велика, то для широты обхвата диспансеризацией разных групп населения разработан ускоренный способ серодиагностики сифилиса, так называемый экспресс-метод – реакция микропреципитации (сокращенно МР, РМП).

Она выполняется с кардиолипиновым антигеном и вспомогательными веществами. Его преимуществом является забор периферической крови для исследования. Это значительно ускоряет и саму методику, и работу лаборантов.

Рисунок 2 - Реакция микропреципитации (схема)

Для проведения МР необходимы плазма или инактивированная сыворотка крови пациента (именно они содержат антитела). Далее плазму помещают в маркированные лунки. Затем, к исследуемому материалу добавляют каплю кардиолипинового антигена, смешивают и встряхивают. В итоге в сыворотке инфицированного появляются характерные хлопья, разные по степени интенсивности.

Это качественная проба. При количественной оценке используются 10 разведений сыворотки, помещаемой в 10 лунок с соответствующей маркировкой. При качественной МР ответ указывается в виде крестов (плюсов) или минуса, при количественной указывается титр антител (1:2, 1:4 и так далее).

Наличие хлопьев расценивается как положительный или слабоположительный ответ. Возможно появление флокулята и при отсутствии заболевания, поэтому окончательную оценку полученного результата проводят после контрольного исследования или проведения других реакций (РИБТ, РИФ, ИФА, РПГА).

9. VDRL

Рекомендованный Всемирной организацией здравоохранения метод постановки реакции с антигеном липоидной природы (АГ) по праву считается лучшим среди других стандартных нетрепонемных тестов. Разработан в США, штате Джорджиа в лаборатории венерических болезней (Veneral Diseases Research Laboratories).

Аббревиатура учреждения послужила названием для пробы – VDRL. VDRL - это модификация МР. Сыворотку от больного сифилисом инактивируют и помещают на предметное стекло. Используемый антиген состоит из кардиолипина, холестерина и лецитина в разном процентном соотношении. Ответ регистрируется практически сразу.

Отчётливая флокуляция возникает в присутствии в сыворотке антител. Сыворотка становится реактивна по прошествии 4-х недель после заражения. Для оценки количества антител, сыворотку предварительно разводят в геометрической прогрессии.

Преимущества VDRL:

1 сравнительно высокая чувствительность;
2 сравнительно высокая специфичность;
3 легкость выполнения;
4 малая стоимость реактивов;
5 получение быстрого ответа.

Недостатком VDRL является относительно высокая частота ложноположительных результатов.

Их причинами являются всё те же перечисленные выше заболевания.

Трепонемные тесты исполняются со специфическими АГ Treponema pallidum. Они необходимы и обязательны для установления окончательного диагноза. Это реакция иммунофлюоресценции (РИФ), реакции непрямой гемагглютинации (РПГА), иммуноферментный анализ (ИФА) и др.

После положительного результата нетрепонемного теста (RPR, MP, VDRL) всегда должны выполняться трепонемные (чаще комбинация - РПГА, ИФА, РИФ).

Трепонемные тесты более сложны в исполнении, чем экспресс-тесты, и требуют больших затрат денежных средств.

10. РИФ

Данная реакция (сокращенно РИФ) используется для диагностики сифилиса, в том числе и скрытых форм, и перепроверки положительных и ложноположительных проб.

РИФ основана на свечении меченых антител при соединении с комплексом антиген-антитело под кварцевой лампой. Метод начал применяться в 60-х годах и отличался простотой выполнения и высокой специфичностью (которая немного уступает РИБТ).

Он имеет несколько модификаций: РИФ-10, РИФ-200 и РИФ-abs.

Наиболее чувствительна РИФ в разведении 10 раз, а остальные - более специфичны. РИФ проводится в двух фазах. К АГ добавляют сыворотку крови пациента. Образуется комплекс АГ-АТ, который исследуется в следующей фазе. Далее меченный с помощью флюоохрома комплекс идентифицируют при микроскопии. Если не наблюдается свечение, это указывает на отсутствие специфических АТ в сыворотке крови.

РИФ-200 является наиболее ценным из всех разведений. Метод предназначен для диагностики различных форм сифилиса, особенно скрытого сифилиса и перепроверки положительных проб.

11. РИБТ

Реакция иммобилизации бледных трепонем (сокращено РИБТ, РИТ) одна из сложных серологических проб, требующих значительных усилий и финансовых затрат. РИБТ применяют все реже, но актуальность ее сохраняется в диагностике скрытого сифилиса.

Большое значение она несёт в распознавании ложноположительных результатов у беременных женщин и основывается на иммобилизации бактерий в присутствии иммобилизинов – поздних антител.

Результат оценивается на процентном количестве (%) иммобилизированных трепонем с помощью специальной таблицы:

1 От 0 до 20 - отрицательная проба.
2 От 21 до 50 - слабоположительная проба.
3 От 50 до 100 - положительная реакция.

Ложноположительные результаты также возможны при применении РИБТ. Так, неверный ответ возможен при инфицировании тропическими трепанематозами, а также, при туберкулёзе, циррозе печени, саркоидозе и пациентов старческого возраста.

12. РПГА

Этот анализ крови на сифилис называется реакцией пассивной гемагглютинации (сокращенно, кровь на РПГА, ТРПГА).

Антиген для РПГА приготавливают из эритроцитов барана, покрытых фрагментами бледных трепонем (полученных от инфицированных кроликов (см. рисунок 4)). Для анализа используется венозная кровь (плазма или инактивированная сыворотка) пациента.

При добавлении антигена в сыворотку пациента с сифилисом происходит образование комплекса АГ-АТ, который приводит к агглютинации эритроцитов. агглютинация определяется субъективно врачом-лаборантом.

Рисунок 3 - Схема РПГА (реакция пассивной гемагглютинации)

Проба оценивается как положительная при появлении агглютинатов равномерной розовой окраски. Окрашивание преципитата в красный свидетельствует об осаждении эритроцитов. РПГА является высокочувствительной и высокоспецифичной.

12.1. Реакция микрогемагглютинации

Она является упрощённым вариантом РПГА. Отличается от пробы, описанной выше, меньшим количеством антигена, разбавителя и сыворотки крови для выполнения реакции. Через 4 часа после инкубации сыворотки можно оценить пробу. Используется при скрининговых и массовых обследованиях на сифилис.

13. Иммуноферментный анализ

Иммуноферментный анализ (сокращенно ИФА) базируется на специфической реакции антиген-антитело. Биологический материал (сыворотка крови пациента, ликвор) вносят в лунки, на твердой поверхности которых фиксированы антигены бледной трепонемы. Исследуемый материал инкубируют, затем отмывают антитела, не связавшиеся с антигенами (см. рисунок 5).

Идентификация полученного комплекса осуществляется на этапе ферментации с помощью иммунной сыворотки, меченной ферментом. При химической реакции фермент окрашивает полученные комплексы. Интенсивность окрашивания зависит от количества специфических антител в крови пациента и фиксируется спектрофотометром.

Рисунок 4 - Схема ИФА (иммуноферментного анализа)

Чувствительность ИФА составляет более 95% . Метод используется в автоматизированном режиме для исследования декретируемых групп населения: доноров, беременных и других, для уточнения диагноза при положительных и ложноположительных нетрепонемных тестах.

14. Иммуноблоттинг

Иммуноблоттинг – высокочувствительный метод, модификация простого ИФА. Реакция основана на электрофорезе с разделением антигенов бледных трепонем.

Разделенные иммунодетерминанты переносят на нитроцеллюлозную бумагу и проявляют в ИФА. Далее инкубируют сыворотку и смывают не связавшиеся антитела. Полученный материал обрабатывают иммуноглобулинами (IgМ или IgG), меченными ферментом.

15. Клиническая оценка результатов лабораторной диагностики сифилиса

В таблице 1 ниже мы привели возможные результаты анализов и их расшифровку. Как можно видеть в таблице, основное значение при расшифровке имеет комплексная оценка тестов.

Таблица 1 - Расшифровка результатов серологических реакций (анализов крови на сифилис). Для просмотра кликните по таблице

Оценка реактивности тестов выполняется также «крестами»:

1 Максимальный ответ (резко положительная проба) обозначается с помощью 4-х крестов.
2 Положительная проба обозначается с помощью 3-х крестов.
3 Слабоположительную реакцию обозначают двумя крестами.
4 Один крест свидетельствует о сомнительном и отрицательном результате.
5 Отрицательный ответ маркируют знаком «минус».

Проблема оптимизации лабораторной диагностики сифилиса не потеряла свою актуальность до настоящего времени. Современные методы диагностики, несмотря на стремление учёных привести диагностику к максимально высоким показателям чувствительности и специфичности, требуют контрольной проверки и индивидуального подхода.

Особенностью сифилитической инфекции является феномен серорезистентности, который так и не получил научного объяснения. Диагноз выставляется после полноценного обследования больного эпидемиологическими, клиническими, лабораторными методами.

На фоне экономико-технического развития медицины наблюдается и прогресс в разработке новых критериев диагностики сифилиса. Всё это позволит быстро, успешно и безошибочно лечить пациентов.