Исследование фекалий. Законодательная база российской федерации

Методы прижизненной лабораторной диагностики гельминтозов:

— гельминтокопрологические исследования;

— гельминтоовоскопические исследования;

— гельминтоларвоскопические исследования;

— иммунобиологическая диагностика;

— диагностическая дегельминтизация и другие методы;

Методы посмертной диагностики:

— патологоанатомические исследования;

— полные и неполные гельминтологические вскрытия органов и тканей (ПГВ и НПГВ).

Прежде чем перейти перечисленных выше вопросов данной темы, считаю уместным дать определение понятия «инвазия» и «инвазионные болезни».

Инвазионные болезни могут протекать как в клинически выраженной форме со значительной смертностью, так и в скрытой (латентной) форме.

В диагностике инвазионных болезней решающее значение имеют лабораторные исследования, в результате которых устанавливается возбудитель.

Рассмотрим методы прижизненной диагностики гельминтозов. Для этого используют как макро- , так и микроскопические исследования, прежде всего фекалий, мочи, крови, дермы, содержимого полостей организма и др. Эти методы гельминто-диагностических исследований, направленные на отыскание и изучение самих гельминтов, их фрагментов Илии яиц и личинок наиболее доказательны и широко применяются для диагностики гельминтозов.

Материал для диагностических исследований должен быть свободен от всяких посторонних примесей и загрязнений, фекалии рекомендуется брать из прямой кишки животного, они должны быть свежими, их следует держать на холоде (не >5 о С), можно также консервировать 5-10 % раствором формалина или карболовой кислоты.

Гельминтоскопия – применяется для обнаружения в фекалиях целых экземпляров гельминтов или их фрагментов, особенно при исследовании на цестодозы кишечника. Этот метод используется также для контроля эффективности проведённой дегельминтизации, для учёта количества изгнанных гельминтов. Для этих исследований необходимо брать всю единовременную порцию фекалий, а с целью учёта эффективности дегельминтизации следует собирать все экскременты, выделенные животным в течение 2-4 суток после обработки. Собранные фекалии предварительно осматривают невооружённым глазом. Затем их помещают в металлический сосуд, разбавляют 5-10 кратным количеством воды, перемешивают и дают некоторое время отстояться, затем верхний слой сливают (до осадка) и снова добавляют воду. Эти манипуляции последовательного промывания и отстаивания проделывают несколько раз. Полученный осадок небольшими порциями исследуют в кюветках (чашках Петри) на белом и чёрном фоне. Всех видимых гельминтов выбирают иглой и исследуют под микроскопом, устанавливая вид.

Гельминтоовоскопия – это методы диагностики гельминтозов в результате обнаружения в материале яиц гельминтов. Для проведения таких исследований применяют следующее оборудование и средства: микроскоп биологический, предметные стёкла, чашки Петри, стакана стеклянные или пластмассовые (диаметром не > 4-5 см), мензурки объёмом 50 мл, фильтрационные ситечки (с капроновой сеткой, чулочной), стеклянные палочки, металлические петли с диаметром кольца 8-10 мм.

Для диагностических исследований используют флотационные растворы. Наилучшей флотационной способностью обладают растворы при температуре 20-22 о С. Плотность раствора уточняем денсиметром. Насыщенный раствор технической селитры или аммония нитрата с плотностью 1,32 (1500 г на 1 литр кипящей воды); натриевой селитры или натрия нитрата с плотностью 1,38 (соотношение соли и горячей воды 1:1); магния сульфата (сернокислая магнезия)с плотностью 1,26-1,28 (920 г на 1 литр горячей воды); натрия тиосульфата или гипосульфита натрия, плотностью 1,38-1,40 (1750 г на 1 литр кипящей воды); сульфат цинка плотностью 1,24 (400 г на 1 литр воды); поваренная соль, плотностью 1,2 (400 г соли в 1 литре воды нагревают до кипения), применяют в холодном состоянии.

Самый простой метод гельминтоовоскопического исследования фекалий – это метод нативного мазка. Небольшой кусочек фекалий помещают на предметное стекло, добавляют 2-3 капли смеси равных частей глицерина и воды, тщательно смешивают, покрывают покровным стеклом и смотрят под микроскопом. Этот метод ненадёжный, так как при слабой инвазии даёт отрицательный результат.

Метод последовательного промывания (метод осаждения, седиментации) применяют для диагностики трематодозов животных, яйца возбудителей которых имеют большой удельный вес и не улавливаются методом всплывания (флотации). Берут 5 г фекалий, смешивают с10 кратным количеством воды, фильтруют через сито или марлю и фильтрат отстаивают 5 минут. Далее жидкость сливают, а к осадку добавляют чистую воду и снова отстаивают 5 минут. До тех пор пока жидкость не станет прозрачной. Жидкость сливают, а осадок исследуют под микроскопом на наличие трематод.

Для диагностики нематодозов и цестодозов чаще всего используют флотационные методы. Наиболее распространённый и чаще применяемый – метод Фюллеборна. Для этого берут 10-20 г фекалий, помещают его в банку или стакан ёмкостью 100-200 мл, тщательно растирают стеклянной или деревянной палочкой в насыщенном растворе поваренной соли. Общее количество добавляемого раствора должно быть примерно в 20 раз больше количества фекалий. Затем фильтруем и оставляем на 30 минут. С поверхности отстоявшейся жидкости металлической петлёй снимаем плёнку и переносим её на предметное стекло, покрываем покровным стеклом и исследуем под микроскопом. Метод Щербовича используют для обнаружения яиц с более высокой плотностью (например, яйца метастронгилид), для чего используют насыщенный раствор сернокислой магнезии. Пробу фекалий (3-5 г) размешивают в воде до получения равномерной взвеси. Фильтруем через ситечко в центрифужную пробирку и центрифугируем 1-2 минуты. Верхний слой сливают, а к осадку добавляют насыщенный раствор сернокислой магнезии, хорошо размешиваем и снова центрифугируем 1-2 минуты. Затем металлической петлёй снимают верхнюю плёнку, помещают её на предметное стекло, накрывают покровным и исследуем под микроскопом.

Метод Котельникова и Хренова. Пробу фекалий (3 г) кладут в стакан и заливают небольшим количеством насыщенного раствора аммиачной селитры, размешиваем стеклянной (деревянной) палочкой и добавляем раствор до 50 мл. Взвесь фильтруем в другой стакан и оставляем на 10-15 минут. Снимаем петлёй 3-4 капли с поверхности, переносим их на предметное стекло и микроскопируем под малым увеличением микроскопа. Обнаруживаем яйца аскарид, трихоцефал, эзофагостом, стронгилоидесов, метастронгилид, неоаскарид, стронгилят органов пищеварения, мониезий и тизаниезий, параскарид, токсокарисов и др.

Метод Н.В. Демидова для диагностики фасциолёза. Пробу фекалий (3г от овец, 5 г от крупного рогатого скота), помещают в стакан, наливают насыщенный раствор хлористого натрия, тщательно размешиваем стеклянной палочкой, отстаивают 15-20 минут. С поверхности удаляют крупные частицы; жидкость отсасывают спринцовкой, или осторожно сливают, оставляют примерно 20-30 мл, к осадку добавляют воду до полного объёма стакана, тщательно размешивают, фильтруют через сито или 1 слой марли; жидкость снова отсасываем, оставляя 15-20 мл осадка; осадок переливают в маленькие конические стаканы, отстаиваем 3-5 минут, жидкость отсасываем и на предметное стекло переносим осадок, исследуя его под малым увеличением микроскопа.

Метод Дарлинга комбинирует процедуры осаждения и флотации. Фекалий смешивают с водой и центрифугируют 3-5 минут. Надосадочную жидкость сливают, а к осадку прибавляют жидкость Дарлинга (глицерин с насыщенным раствором хлористого натрия, 1:1), тщательно размешивают и вторично центрифугируют 3-5 минут. Металлической петлёй снимаем плёнку на предметное стекло, накрываем покровным и исследуют.

Есть ещё много модифицированных методов исследования с целью обнаружения яиц гельминтов. Существуют стандартизированные методы Фюллеборна, Щербовича и др. При всех исследованиях берут одинаковую посуду, одно и то же время отстаивают и центрифугируют пробы, пользуются петлями одинакового диаметра и, сравнивая число яиц в поле зрения микроскопа или в одной капле поверхностной плёнки до и после обработки животных, судят об эффективности проведённой дегельминтизации. Наиболее простой и достаточно точной является методика, предложенная М.Ш.Акбаевым с использованием сетки, изготовленной из фотоплёнки после рентгеновских снимков. Кроме того, используются количественные гельминтоовоскопические исследования.

Метод Стола. В 100 мл колбочку наливают вначале 56 мл воды и отмечают снаружи на уровне её мениска. Потом наливают ещё 4 мл воды и делают новую отметку. Воду выливают, а в градуированную колбочку наливают 56 мл 0,1н раствора едкого натра, добавляют столько фекалий, чтобы уровень жидкости достиг отметки 60 мл. (4 см 3 фекалий), всыпают 10-15 бусинок, тщательно взбалтывают. Сразу же после взбалтывания градуированной пипеткой набирают 0,075 мл или 0,1 мл смеси, наносят на предметное стекло и исследуют под микроскопом, подсчитывая число яиц гельминтов. Количество яиц в 1 см 3 (1 г) фекалий, найденное число яиц умножают на 200 (если исследовали 0,075 мл смеси) или на 150 (если 0,1 мл смеси).

Гельминтоларвоскопические исследования применяются для диагностики диктиокаулёза, мюллериоза и др. протостронгилидозов, а также стронгилятозов пищеварительного тракта жвачных и стронгилоидозов разных животных.

Метод Бермана и Орлова. 10 г фекалий помещают в воронки аппарата Бермана на металлической сетке или завёрнутые в кусочки марли. Заливают водой комнатной температуры и оставляют на 3-6 часов. За это время личинки выползают из пробы в жидкость и опускаются по трубке на дно пробирки. Жидкость из пробирки сливают и отсасывают. Осадок после встряхивания разливают на предметное стекло и микроскопируют при малом увеличении микроскопа. Личинки нематод подвижны и легко обнаруживаются.

Упрощённая модификация метода Бермана (по Шильникову). В стакан с водой кладут пробы фекалий и завёрнутые в марлевые салфетки. Через 3-6 часов пробы вынимают, жидкость отстаивают 10-15 минут, затем пипеткой отсасывают прозрачный слой воды. Затем каплю осадка пипеткой наносят на предметное стекло для микроскопии.

Метод седиментации с центрифугированием. (экспресс-методика по Котельникову и др.). 3-5 г фекалий кладут в пробирки с водой (20-25 о С) и центрифугируют (1000-1500 оборотов в минуту) 2 минуты. Затем воду сливаем, а осадок, встряхнув, выливают на предметное стекло и исследуют на наличие личинок.

Метод Вайда. На предметное или часовое стекло кладут несколько шариков фекалий от овец, коз и добавляют воды температурой 40 о С. Через 4о минут шарики удаляют и исследуют под микроскопом жидкость, оставшуюся на стекле на наличие личинок нематод. Обнаруженных разными методами личинок необходимо дифференцировать.

Исследование крови по Куликову. Из ярёмной вены набирают 20 мл крови и добавляют 2 мл 3,8 % водного раствора лимонно-кислого натрия и отстаивают в течение 20-25 минут. Образуется 3 слоя: нижний – осевшие эритроциты, средний – лейкоциты и личинки нематод и верхний – сыворотка. Тонкой пипеткой, берут содержимое среднего слоя, наносят его каплями на предметное стекло, накрывают покровным и смотрят под микроскопом.

Исследование крови крупного рогатого скота (по Стюарду). Кожу освобождаем от волос, место дезинфицируем. Пинцетом оттягиваем кожу и кривыми ножницами отрезают поверхностный слой. Помещают на предметное стекло в каплю физраствора и тщательно расщепляют препаровальными иглами. Жидкость исследуют под микроскопом.

Исследование кожи лошадей по Р.С.Чеботарёву. На холке, плече, других местах выбирают участок кожи размером 5 см 2 , дезинфицируем спиртом. Захватываем кожу в складку, отрезаем кусочек толщиной 3-4 мм и площадью 2-3 см 2 . Срезы помещают в пробирке и заливают 2-3 мл физраствора и оставляют на несколько часов в термостате при 36-37 о С или при комнатной температуре. Затем содержимое пробирки выливаем на часовое стекло и исследуют под микроскопом, с целью обнаружения личинок онхоцерков.

Иммунобиологическая диагностика. В практике используют аллергические реакции для диагностики тканевых гельминтозов или, так называемых, ларвальных цестодозов, таких как эхинококкоз, ценуроз, цистицеркозы, а также нематодозов как трихинеллёза. Для этого применяют внутрикожную пробу. В качестве антигена рекомендуют жидкость из личинок (пузырей) или экстракты из трихинелл и их личинок.

В настоящее время большое внимание уделяют разработке и использованию серологических реакций, используя в качестве антигенов живых личинок гельминтов. По этому принципу ставят реакции микропреципитации на живых личинках нематод при нематодозах, на церкариях — при трематодозах, на онкосферах и сколексах — при ларвальных цестодозах. Другой принцип серологических реакций связан с использованием соматических антигенов. Применяют реакции гемагглютинации и флоккуляции (агглютинации) с адсорбированными антигенами. В качестве адсорбентов используют кармин, бентонит и латекссинтетическая смола.

Разновидностью серологических реакций являются: реакция сколексопреципитации (РСкП), разработанная Р.С.Шульц и Р.Г.Исмагиловой для диагностики эхинококкоза овец. Другие реакции: РНГА, РЗГА и др.

Диагностическая дегельминтизация является методом макрогельминтоскопи-ческого исследования. Используют её при подозрении на мониезиоз, тизаниезиоз, авителлиноз жвачных, аноплоцефалидозы лошадей, тениидозы плотоядных, дрепанидотениоз водоплавающих птиц, аскаридоз свиней, аскаридиоз кур и др. небольшой группе животных; наиболее подозрительных в заболевании, вводят соответствующий антгельминтик в лечебной или заниженной дозе. За животными наблюдают и проверяют все выделенные экскременты с целью обнаружения гельминтов или их фрагментов, которые в дальнейшем исследуют.

И, наконец, методы исследования других органов.

Исследование мочи: при диоктофимозе почек, капилляриозе мочевого пузыря. Мочу следует предварительно просмотреть макроскопически или при помощи лупы на наличие гельминтов или их фрагментов. Мочу разбавляют пополам дистиллированной водой и центрифугируют 2-3 минуты, жидкость сливают, а осадок наносят на предметные стёкла и исследуют.

Исследование содержимого трахеи птиц: в ней хорошо видны сингамусы или циатостомы, которые обычно имеют яркокрасный цвет.

Исследование камеры глаза. Прижизненная диагностика сетариоза глаз лошадей и крупного рогатого скота — проводят макроскопическим исследованием передней камеры поражённого глаза, где можно видеть свободноплавающих сетарий (5-10 см) и хорошо просвечивает даже через помутневшую роговицу.

Исследование поверхностного соскоба с перианальных складок: палочку или спичку, смоченную 50 % водным раствором глицерина делают соскоб с перианальных складок с внутренней стороны корня хвоста и с области промежности. Соскоб переносят на предметное стекло в 2-3 капли глицерина (1:1 в воде), покрываем покровным стеклом и исследуем под микроскопом на наличие яиц оксиурат.

Методы посмертной диагностики гельминтозов

— патологогистологические исследования. Посмертная диагностика гельминтозов различных стадий их развития в органах и тканях животных. Наиболее совершенная методика гельминтологического вскрытия разработана К.И.Скрябиым. Различают полное и неполное гельминтологическое вскрытие.

Полное гельминтологическое вскрытие – наиболее надёжный метод, позволяющий производить как количественный, так и качественный учёт всех гельминтов, которыми инвазировано животное.

Суть данного метода: после снятия с трупа кожи, тщательно осматривают подкожную клетчатку, затем вскрывают грудную и брюшную полости и извлекают все органы систем: пищеварительную, дыхательную систему, кровеносную, мочеполовую и др.

Органы отделяют и исследуют порознь, при этом используют метод последовательных смывов. Паренхиматозные органы (печень, лёгкие, поджелудочная железа, почки и др.) помещают в отдельную посуду и превращают в фарш, разрывая руками или разрезая на мелкие кусочки ножом или ножницами. Далее этот детрит отмывают водой или физраствором, пользуясь методом последовательных смывов. Полученный осадок изучают небольшими порциями сначала в чёрных, а затем в белых кюветах или в чашках Петри на чёрном и белом фоне. Крупных гельминтов выбирают визуально, а мелких – при помощи ручной лупы с 8-10-кратным увеличением. Собирают гельминтов только кисточкой или препаровальными иглами, но не пинцетом и непальцами.

НПГВ – упрощённое гельминтологическое вскрытие, в процессе которого извлекают из органов и тканей лишь отдельных резко выделяющихся по размерам гельминтов. Его используют также для получения музейного материала.

Гельминтологические исследования объектов внешней среды. Сбор консервирование и пересылка гельминтов. Фиксация, окраска гельминтов и приготовление из них постоянных микропрепаратов. Приготовление музейных макропрепаратов. Лабораторная диагностика трематодозов. Диагностика: фасциолёза, дикроцелиоза, описторхоза, парамфистоматоза, простогонимоза птиц, эхиностомоза уток и гусей.

При проведения этого метода собирают свежие порции фекалий от животных, их кладут в сосуд, заливают водой в соотношении 1:5 и 1:10, тщательно перемешивают. Взвесь оставляют на 5 мин. для осаждения. Затем верхний слой сливают до осадка, после чего снова заливают водой и повторяют эти операции до тех пор, пока жидкость над осадком не будет прозрачной. После надосадочную жидкость сливают последний раз, а осадок помещают в кювет или чашку Петри для исследования под лупой. Так как одни гельминты хорошо видны на белом фоне, а другие на черном, то для более полной выборки гельминтов чашку Петри ставят то на белую, то на черную бумагу. Гельминты выбирают препаровальной иглой или кисточкой, а затем микроскопируют для установления вида, при этом пользуются ручной, а также штативной лупой или стереоскопическим микроскопом.

2.2. Метод отсеивания

При этом методе используют набор из 2 – 4 металлических сит с отверстиями убывающего диаметра. Струей воды промывают фекалии, при этом частицы фекалий уносятся водой, а гельминты в зависимости 6v величины задерживаются на разных ситах. Затем гельминтов выбирают и исследуют. Этим методом можно собрать гельминтов разной величины

3. Методы гельминтоовоскопии

Гельминтоовоскопия (от латинского ovum – яйцо, греческого skopeo – смотрю) объединяет группу методов исследования, с помощью которых выявляют яйца возбудителей гельминтозов.

Предложено много методов овоскопии. Но не все они заслуживают практического внимания: одни сложны по технике выполнения, при исследовании другими требуется значительное время, третьи малоэффективны. В данной работе мы приведем только те методы, которые заслуживают практического внимания.

Удельный вес яиц тяжелее обычной воды, вследствие этого яйца гельминтов, как более тяжелые частички вымываются из фекалий водой и оседают на дно сосуда с различной скоростью, в зависимости от удельного веса, Быстрее всего оседают яйца более крупного размера.

В растворах же солей высокого удельного веса яйца гельминтов наоборот всплывают (явление флотации) в верхний слой и концентрируются в нем.

На использовании этих физических закономерностей основала технология всех современных методов гельминтоовоскопии, которые подразделяются на три группы:

а) Методы осаждения (седиментации) яиц гельминтов;

б) Методы флотации яиц гельминтов;

в) Комбинированные методы (осаждения и флотации) яиц гельминтов.

3.1. Методы осаждения (седиментации)

Основаны на принципе осаждения взвешенных в жидкости яиц гельминтов, промывки осадка и исследования его. Эти методы применяются в основном для диагностики тех гельминтозов, возбудители которых выделяют яйца с высоким удельным весом (фасциолез, дикроцелиоз, парамфистоматоз, описторхоз и др.). Методики осаждения менее эффективны и более трудоемки, чем флотации. Это связано со сложностью отыскания яиц гельминтов в осадке взвеси.

3.1.1 .Метод последовательных смывов

Пробу фекалий весом 3-5 г кладут в стакан, вливают небольшое количество воды и размешивают палочкой или пинцетом до получения жидкой кашицеобразной массы, затем добавляют воду порциями до объема 50 мл при постоянном размешивании; После взвесь процеживают через металлическое сито или марлю в другой стакан, в нем отстаивают в течение 5-10 мин. Затем верхний слой жидкости над осадком сливают, а к осадку добавляют новую порцию воды и вновь отстаивают в течение 5 – 10 мин. Описанная процедура повторяется до тех-пор, пока вода не станет прозрачной. Ее в последний раз сливают, а осадок (около 5 мл) разливают на предметные стекла или стекла большего размера (12x19) и микроскопирутот.

Эта методика широко применяется в ветеринарных лабораториях для диагностики фасциолеза, дикроцелиоза, парамфистоматоза, эуриггрематоза и других гельминтозов жвачных. Вместе с тем, она трудоемка и по диагностической эффективности значительно уступает специальным флотационным и комбинированным методам гельминтоовоскопии.

При обнаружении яиц гельминтов на различных объектах окру­жающей среды (почва, вода, овощи и др.) всегда необходимо опре­делять их жизнеспособность по внешнему виду, окрашиванием ви­тальными красками, культивированием в оптимальных условиях и постановкой биологической пробы, т.е.

Скармливанием лаборатор­ным животным.

Определение жизнеспособности яиц или личинок гельминтов по внешнему виду. Яйца гельминтов микроскопируют вначале при ма­лом, затем при большом увеличении. У деформированных и мерт­вых яиц гельминтов оболочка разорвана или прогнута внутрь, плаз­ма мутная, разрыхлена. У сегментированных яиц шары дробления (бластомеры) неравного размера, неправильной формы, часто сдви­нуты к одному полюсу. Иногда встречаются аномальные яйца, ко­торые, имея внешние уродства, развиваются нормально. У живых личинок аскарид мелкая зернистость имеется только в средней час­ти тела, по мере их гибели зернистость распространяется по всему телу, появляются крупные блестящие гиалиновые вакуоли - так называемые нитки жемчуга.

Для определения жизнеспособности зрелых яиц аскарид, власо­главов, остриц следует вызывать активные движения личинок лег­ким подогреванием препарата (до температуры не выше 37 °С). Жиз­неспособность личинок аскарид и власоглавов удобнее наблюдать после их выделения из скорлупы яйца надавливанием на покровное стекло препарата препаровальной иглой или пинцетом.

У инвазионных личинок аскарид часто замечается чехлик, отсло­ившийся на головном конце, а у закончивших развитие в яйце ли­чинок власоглавов на этом месте при большом увеличении обнару­живается стилет. У погибших личинок гельминтов независимо от места их нахождения (в яйце или вне его) замечают распад тела. При этом внутренняя структура личинки становится глыбчатой или зер­нистой, а тело мутным и непрозрачным. В теле обнаруживаются ва­куоли, а на кутикуле - разрывы.

Жизнеспособность онкосфер тениид (бычьего, свиного цепней и др.) определяют по движению зародышей при воздействии на них пищеварительных ферментов. Яйца помещают на часовое стекло с желудочным соком собаки или искусственным дуоденальным соком. Состав последнего: панкреатина 0,5 г, натрия бикарбоната 0,09 г, дистиллированной воды 5 мл. Часовые стекла с яйцами ставят в термостат при 36-38 “С на 4 ч. При этом живые зародыши осво­бождаются от оболочек. Оболочки живых онкосфер также раство­ряются в подкисленном пепсине и в щелочном растворе трипсина через 6-8 ч в термостате при 38 °С.

Если поместить яйца тениид в 1 % раствор натрия сульфида, или 20 % раствор натрия гипохлорида, или же в 1 % раствор хлорной воды при 36-38 °С, зрелые и живые зародыши освобождаются от оболочек и не изменяются в течение 1 сут. Незрелые и мертвые он­косферы сморщиваются или набухают и резко увеличиваются, а затем «растворяются» в течение 10 мин - 2 ч. Живые зародыши тениид также активно двигаются в смеси 1 % раствора натрия хлорида, 0,5 % раствора натрия гидрокарбоната и желчи при 36- 38 °С.

Жизнеспособность сколексов эхинококков определяют при сла­бом нагревании. Для этого отмытые в воде сколексы или выводко­вые капсулы помещают в каплю воды на предметное стекло с лу­ночкой, покрывают покровным стеклом и исследуют под микроско­пом с нагревательным столиком при температуре 38-39 °С. Если отсутствует нагревательный столик, препарат подогревают при помощи любого источника тепла. При этом жизнеспособные ско­лексы активно двигаются, сокращая или расслабляя присоски, уд­линяя и укорачивая хоботок. Если поместить сколексы в 0,5-1 % водный раствор филицилена при комнатной температуре, то все жизнеспособные сколексы быстро вывернутся и погибнут. Нежиз­неспособные сколексы при этом не вывертываются.

Жизнеспособность адолескариев фасциол, собранных на расте­ниях и других объектах водоемов, проверяют исследованием их на предметном стекле в физиологическом растворе под микроскопом с нагревательным столиком. При подогревании личинки тремато­ды, находящиеся в цисте, начинают двигаться.

Жизнеспособность яиц карликового цепня определяют по распо­ложению крючьев на зародыше.

В живых яйцах карликового цепня происходят вялые маятнико­образные движения протоплазмы и почти незаметные раздвигания и сдвигания заостренных концов латеральной пары крючьев в сто­роны от средней пары.

Сокращения протоплазмы зародыша и зародышевых крючьев помогают зародышу освободиться сначала от оболочек онкосферы, а затем и от наружной оболочки яйца.

В живом яйце медианная пара и боковые пары крючьев распо­ложены параллельно, в некоторых яйцах лезвия боковых пар сбли­жены и расположены по отношению к средней паре крючьев под углом менее 45°.

Погибающий зародыш конвульсивно сокращается и вяло раздви­гает крючья. В погибшем зародыше движение крючьев прекраща­ется, и они располагаются в беспорядке, иногда же латеральные по отношению к соседней паре крючья бывают раздвинуты под пря­мым, тупым или острым углом.

Иногда наблюдаются сморщивание зародыша, образование зер­нистости. Более точен метод, основанный на появлении движений онкосферы при резкой смене температур: от 5-10 до 38-40 °С.

Определение жизнеспособности незрелых нематод следует изу­чать во влажной камере (чашках Петри), помещая яйца аскарид в 3 % раствор формалина, приготовленный на изотоническом раство­ре натрия хлорида при температуре 24-30 °С, яйца власоглавов в 3 % раствор соляной кислоты при температуре 30-35 °С, яйца ост­риц в изотонический раствор натрия хлорида при температуре 37 “С. Чашки Петри следует открывать 1-3 раза в неделю для луч­шей аэрации и снова увлажнять фильтровальную бумагу чистой водой.

Наблюдения за развитием яиц гельминтов ведут не реже 2 раз в неделю. Отсутствие признаков развития в течение 2-3 мес свиде­тельствует о их нежизнеспособности. Признаками развития яиц гель­минтов являются сначала стадии дробления, деление содержимого яйца на отдельные бластомеры. В течение первых суток развивает­ся до 16 бластомер, которые переходят во вторую стадию - морулу и т.д.

Яйца анкилостомид культивируют в стеклянном цилиндре (вы­сотой 50 см и диаметром 7 см), закрытом пробкой. Смесь из рав­ных объемов стерильного песка, древесного угля и испражнений с яйцами анкилостомид, разведенную водой до полужидкой консис­тенции, осторожно наливают на дно цилиндра при помощи стеклян­ной трубки. В течение 1-2-суточного отстаивания в темноте при температуре 25-30 °С из яиц вылупляются рабдитовидные личин­ки, а через 5-7 сут они становятся уже филяриевидными: личинки выползают вверх по стенкам цилиндра, где видны даже невооружен­ным глазом. Естественно развивающиеся в воде яйца трематод, на­пример описторхов, дифиллоботриид, фасциол и др., помещают на часовое стекло, чашку Петри или в другой сосуд, наливают неболь­шой слой обычной воды. При культивировании яиц фасциол сле­дует учесть, что они быстрее развиваются в темноте, при этом в живых яйцах при температуре 22-24 °С через 9-12 сут формиру­ется мирацидий. При микроскопировании развивающихся яиц тре­матод хорошо заметны движения мирацидия. Мирацидий фасциолы из оболочек яйца выходит только на свету. При культивирова­нии воду меняют через 2--3 сут.

Личинки анкилостомид и стронгилоид культивируют на агаре в чашке Петри с животным углем. После нахождения в термостате при температуре 26-30 °С в течение 5-6 сут личинки расползают­ся по агару, оставляя за собой дорожку из бактерий (метод Фюллеборна).

Метод Harada и Mori (1955). В пробирки, помещенные в штатив, добавляют 7 мл дистиллированной воды. Деревянной палочкой бе­рут 0,5 г испражнений и делают мазок на фильтровально# бумаге (15X150 мм) в 5 см от левого края (эту операцию проводят на листе бумаги, чтобы защитить поверхность лабораторного стола). Затем полоску с мазком вставляют в пробирку так, чтобы свободный от мазка левый конец достигал дна пробирки. Верхний конец накры­вают куском целлофана и плотно обхватывают резинкой. На про­бирке пишут номер и фамилию обследуемого. В таком состоянии пробирки хранят в течение 8-10 сут при температуре 28 °С. Для изучения культуры снимают и удаляют целлофановую покрышку и извлекают пинцетом полоску фильтровальной бумаги. При этом следует проявлять осторожность, так как небольшое количество инвазионных личинок может передвигаться к верхнему концу филь­тровальной бумаги или к стенке пробирки и проникать под повер­хность целлофана.

Пробирки помещают в горячую водяную баню при температуре 50 °С на 15 мин, после чего содержимое их встряхивают и быстро переливают в 15-миллилитровую пробирку для осаждения личинок. После центрифугирования надосадочную жидкость удаляют, а оса­док переносят на предметное стекло, накрывают покровным стек­лом и микроскопируют под малым увеличением.

Для дифференциального диагноза филяриевидных личинок не­обходимо пользоваться данными, представленными в табл. 13.

Методы окрашивания яиц и личинок гельминтов. Мертвые тка­ни в большинстве случаев воспринимают краски быстрее, чем жи­вые. Эти особенности используют в гельминтологии для определе­ния жизнеспособности яиц и личинок гельминтов. Однако в отдель­ных случаях некоторые краски лучше воспринимаются живыми тканями, чем мертвыми.

Таблица 13. Дифференциальная диагностика филярневидных личинок A.duodenale, N.americanus, Strongyloides stercoralis, Trichostrongylus spp.

Для дифференциального распознавания живых и мертвых яиц и личинок применяют следующие краски и способы.

Для окраски живых и мертвых тканей используют лейкобазу метиленового синего. Живая клетка или ткань редуцируют метиле­новый синий в бесцветную лейкобазу, мертвая ткань не обладает такой способностью, поэтому приобретает окраску.

Для окраски яиц аскарид можно использовать метиленовый си­ний в растворе молочной кислоты с едкой щелочью (метиленового синего 0,05 г, едкого натра 0,5 г, молочной кислоты 15 мл). Живые яйца окраску не воспринимают, зародыши мертвых яиц окрашива­ются в синий цвет.

Метод окрашивания неприменим для незрелых яиц аскарид и власоглавов; пигментированная оболочка прокрашивается, и поэтому не видно, окрасилась ли зародышевая клетка внутри яйца.

Окрашивание личинок аскарид основным раствором краски бриллианткрезилового синего в концентрации 1:10 ООО осуществля­ют следующим образом: на предметное стекло наносят каплю жид­кости с яйцами аскарид и каплю основного раствора краски. Пре­парат накрывают покровным стеклом, которое плотно прижимают к предметному при легком постукивании препаровальной иглой. Под микроскопом наблюдают количество вышедших личинок и степень их окрашиваемости, после чего этот же препарат просмат­ривают повторно через 2-3 ч. Живыми считаются только недеформированные личинки, не окрасившиеся в течение 2 ч. Мертвые ли­чинки окрашиваются при разрыве скорлупы (частично или полно­стью).

Указывается на возможность окраски препаратов раствором йода при определении жизнеспособности яиц аскаридий птиц. В ка­честве красителя в этом случае используют 5 % спиртовой раствор йода. При его нанесении на препарат зародыши мертвых яиц аска­ридий в течение 1-3 с окрашиваются в оранжевый цвет. Мертвые яйца описторха и онкосферы бычьего цепня окрашиваются раство­ром толуидинового синего (1:1000), а мертвые онкосферы бычьего цепня - раствором бриллианткрезилового синего (1:10 000). При этом приобретают цвет зародыши и оболочки как мертвых, так и живых яиц. Поэтому после окраски яйца и онкосферы отмывают в чистой воде и дополнительно окрашивают сафранином (в разведе­нии 1:10 000 10 % раствора спирта). Спирт удаляет краску с оболо­чек, а сафранин придает им красный цвет. В результате живые яйца окрашиваются в красный цвет, зародыш у мертвых - в синий, а оболочка остается красной. Мертвые зародыши онкосфер бычьего цепня быстро, в течение нескольких минут, окрашиваются в ярко-красный или розовый цвет сафранином либо в синий цвет бриллианткрезиловым синим в разведении 1:4000 или же индигокармином в разведении 1:1000-1:2000.

Живые зародыши не изменяются под влиянием этих красок даже спустя 2-7 ч.

Для определения жизнеспособности яиц карликового цепня ре­комендуется использовать следующие краски: 1) бриллианткрезиловый синий (1:8000) - через 1 ч у мертвых яиц особенно ярко окра­шивается онкосфера, которая резко выделяется на бледном или бес­цветном фоне остального яйца; 2) сафранин: в разведении 1:8000 при воздействии в течение 2 ч и 1:5000 - в течение 3-5 ч; 3) 50 % ра­створ пирогалловой кислоты в разведении 1:2 - при воздействии в течение 1 ч при температуре 29-30 “С (чем ниже температура, тем продолжительнее процесс окрашивания).

Живые плероцеркоиды лентеца широкого очень хорошо прокраши­ваются водным раствором (1:1000) нейтральрот в течение 5-20 мин. Для получения стойкой розовой окраски, не исчезающей в течение 5 сут и не влияющей на подвижность плероцеркоидов, обычно дос­таточно 10 мин. Степень окраски контролируют путем просмотра личинок в чистом изотоническом растворе натрия хлорида, для чего плероцеркоидов периодически извлекают из краски. Целесообраз­но применять метиленовый синий для окрашивания мертвых пле­роцеркоидов.

Р.Э.Чобанов и др. (1986) предложили методику определения жиз­неспособности яиц и личинок гельминтов с использованием в каче­стве красителя пигмента «рубрин», получаемого при культивиро­вании плесневого гриба Peniciliium rubrum. Для этого используют 3 % водный раствор красителя.

Процесс окраски яиц и личинок завершается через 1,5 ч. Нежиз­неспособные яйца остриц, бычьего и карликового цепней, анкило­стомид, трихостронгилид приобретают интенсивный розовый цвет, личинки анкилостомид и трихостронгилид - красный. Менее яр­кая окраска наблюдается у яиц аскарид и власоглавов, так как, выделяясь из кишечника, они уже имеют темно-коричневый цвет: Жизнеспособные яйца и личинки не окрашиваются.

Физико-химические методы стимуляции выхода мирацвдия из яиц трематод. Методы разработаны С.М.Герман и С.А.Беэром (1984) для определения жизнеспособности яиц описторхов и дикроцелиумов путем воздействия реакционной среды на яйца. Если они живые, происходит выхождение мирацидия. Методы основаны на физико­химической активации железы вылупления мирацидия и стимуляции двигательной активности личинки. Стимуляция достигается воздей­ствием на яйца трематоды специальной реакционной среды в соче­тании с последовательными приемами - созданием перепада тем­ператур, подсушиванием взвеси яиц, воздействием слабого тока жидкости в исследуемой капле, которые способствуют массовому выходу мирацидиев из яиц.

Определение жизнеспособности яиц описторха по методу Герман, Беэра. Взвесь яиц в воде (водопроводной, отстоявшейся) предвари­тельно охлаждают до 10-12 °С. Все последующие операции осуще­ствляют при комнатной температуре (18-22 °С). В центрифужную пробирку вносят одну каплю (примерно 0,05 мл) взвеси, содержа­щей 100-400 яиц. Пробирки ставят в штатив на 5-10 мин, чтобы осадить яйца. Затем узкой полоской фильтровальной бумаги осто­рожно отсасывают излишек воды до полного ее удаления. В пробир­ку добавляют 2 капли среды, встряхивают, содержимое переносят пипеткой на предметное стекло и оставляют на 5-10 мин, слегка покачивая (или же помещают под фен) для создания слабых токов жидкости в исследуемой капле взвеси. Эта операция, имитирующая перистальтику кишечника моллюска, позволяет активизировать выход мирацидиев. После этого к взвеси добавляют еще 2 капли среды и затем препарат микроскопируют с помощью обычного све­тового микроскопа (Х200). За это время у яиц с жизнеспособным мирацидием должна открыться крышечка, при этом личинка актив­но выходит в среду. Благодаря наличию в ней этанола мирацидий через 3-5 мин обездвиживается, а затем прокрашивается красите­лем, находящимся в среде. В итоге легко обнаруживают и подсчи­тывают мирацидии.

Приготовление реакционной среды. Среду готовят на 0,05 М трис- HCi буфере в оптимальных режимах pH 8,0-9,5. В буфер добавля­ют этанол до 10-13 % и краситель (сафранин, метиленовый синий и другие, работающие в пределах pH) до слабого окрашивания жидкости (например, для сафранина его конечная концентрация составит 1:50 000). Можно использовать и другой буфер, работаю­щий в щелочных пределах pH, например 0,05 М фосфатный (pH 8,5). Следовательно, среда содержит 96 % этанол - 12 частей; краситель (маточный раствор) - 1-10 частей; 0,05 М трис-НС! буфер (pH 8,5-9,5) - до 100 частей. Пример среды: 12 частей 96 % этанола, 1 часть насыщенного раствора сафранина, остальное до 100 частей - 0,05 М трис-HCl буфер, pH 9,5.

Определение жизнеспособности яиц дикроцелиума по методу Гер­ман, Беэра, Стратана. Каплю взвеси, содержащую 100-150 яиц тре­матоды, помещают в центрифужную пробирку на 1-2 мин для осаждения яиц. Затем жидкость осторожно подсушивают с помощью полоски фильтровальной бумаги. Добавляют пастеровской пипет­кой 1-2 капли реакционной среды и инкубируют на водяной бане при 28-30 °С 2-3 мин. Состав среды: 6 частей бутанола, 94 части 0,4 % раствора хлорида натрия или 0,3 % раствора хлорида калия в дистиллированной воде. Яйца в среде переносят пипеткой на пред­метное стекло и оставляют на 1,5-2 ч при комнатной температуре (18-22 °С), при этом каждые 25-30 мин (по мере подсыхания) до­бавляют по 1-2 капли (0,05 мл) раствора бутанола в дистиллиро­ванной воде. После этого препарат микроскопируют при 100-200- кратном увеличении. Жизнеспособность определяют по числу рас­крывшихся яиц с вышедшими мирацидиями. Бутанол проникает через поры оболочки яиц, достигает мирацидиев и активизирует их. Инкубация при отмеченной температуре усиливает этот процесс. Бутанол в концентрации 3-7 % губителен для вышедшего из яйца мирацидия. Перенос взвеси яиц из пробирки на предметное стекло позволяет к моменту выхода мирацидия (через 30-40 мин) снизить концентрацию бутанола за счет улетучивания до безопасного уровня (1,5-0,5 %). Наличие в среде хлорида натрия в концентрации 0,1- 0,5 % (или хлорида калия в концентрации 0,05-0,4 %) обусловли­вает активность вышедшего мирацидия. В отличие от мелких про­зрачных яиц описторха яйца дикроцелиума имеют темноокрашенную оболочку, у них хорошо заметна крышечка, открытая после выхода мирацидия. Поэтому жизнеспособность яиц дикроцелиума удобнее оценивать путем подсчета раскрывшихся яиц, а не окраши­вания и подсчета мирацидиев.

Люминесцентный метод исследования яиц и личинок гельминтов.

Впервые в гельминтологической практике методы люминесцентной микроскопии были применены в 1955 г. При этом сообщалось, что люминесцентная микроскопия дает возможность дифференциро­вать живые и мертвые объекты без повреждения яйца. Для флюо­ресценции использовались не УФ-лучи, а сине-фиолетовая часть видимого света, с обычным микроскопом и предметными стекла­ми; к осветителю «ОИ-18» применялся специальный набор цветных фильтров.

Было установлено, что живые и мертвые яйца аскарид, остриц, карликовых цепней, бычьего цепня, широкого лентеца и других гель­минтов люминесцируют неодинаково. Это явление наблюдается как при первичной люминесценции без применения красителей, так и при окраске флюорохромами (акридиновый оранжевый, корифосфин, примулин,ауролин,сульфат берлерина, трипафлавин,риванол, акрихин и др.).

Неокрашенные живые несегментированные яйца аскарид светятся ярко-зеленым светом с желтоватым оттенком; у мертвых яиц обо­лочка излучает зеленый свет значительно ярче, чем темно-зеленая зародышевая; у яиц аскарид с личинкой проявляется только оболоч­ка, а у мертвых и оболочка, и личинка ярко-желтого цвета.

Непигментированные и несегментированные живые яйца остриц и карликовых цепней излучают зеленовато-желтый свет; у мертвых яиц интенсивно люминесцирует оболочка на фоне темно-зеленой зародышевой массы. При вторичной люминесценции (при окраске акридиновым оранжевым в разведении 1:10 ООО и 1: 50 ООО от 30 мин до 2 ч) оболочка живых и мертвых нематод, трематод и цестод люминесцирует неодинаково.

Скорлупа живых и мертвых Ascaris lumbricoides, Toxocara leonina, Enterobius vermicularis, Hymenolepis nana, H.fraterna, H. diminuta, T.saginatus, D.latum окрашивается в оранжево-красный цвет. Зародыши живых Asc. lumbricoides, T.leonina, H.diminuta, D.latum и онкосферы бычьего цепня люминесцируют тусклым темно-зеленым или серо-зеленым цветом. Мертвые зародыши этих яиц гельминтов излучают «горящий» оранжево-красный свет. Живые личинки ост­риц и токсокар (освобожденные от скорлупы яйца) излучают туск­лый серо-зеленый свет, при их гибели цвет изменяется от головного конца в «горящий» светло-зеленый, затем желтый, оранжевый и, наконец, ярко-оранжевый.

При окраске флюорохромами - корифосфилом, примулином - у мертвых яиц аскарид и власоглавов наблюдается свечение от ли­лово-желтого до медно-красного цвета. Жизнеспособные яйца не люминесцируют, а окрашиваются в темно-зеленый цвет. Живые яйца трематод Paragonimus westermani и Clonorchis sinensis не люминес­цируют после окраски акридиновым оранжевым, а от мертвых яиц исходит желтовато-зеленый свет.

Метод люминесценции может быть применен и для определения жизнеспособности личинок гельминтов. Так, флюорохромированные раствором акридинового оранжевого (1:2000) личинки строн­гилят, рабдитат светятся: живые - зеленым (с оттенком), мерт­вые - ярко-оранжевым светом. Живые личинки трихинелл не светятся или дают слабое свечение при 10-минутной обработке ра­створами изотиоцианата флюоресцеина, аурамина и др. Флюорохромированные мертвые личинки (в концентрации 1:5000) дают яр­кое свечение.

Живые мирацидии, вышедшие из оболочки, излучают тусклый голубоватый свет с еле заметным светло-желтым венчиком ресни­чек, но спустя 10-15 мин после гибели проявляются ярким «горя­щим» светло-зеленым, а затем оранжево-красным светом.

Существует несколько методик, помогающих выявлять наличие глистов в большой воде. Одна из них применяется для анализа жидкости в резервуарах с непроточной водой. Она заключается в использовании планктонного фильтра, который устанавливается в воронку Гольдмана и подключается к вакуумному насосу. После прокачки жидкости из фильтра извлекается осадок, затем он мазками наносится на стекло и изучается под микроскопом.

Исследование воды на наличие глистов в проточных водоемах производится при помощи матерчатого фильтра. Он вставляется в планктонную сетку, похожую на большой конус. К самому узкому концу конуса прикрепляется металлическая трубка. Подобное приспособление прикрепляется к веревке, веревка к лодке. Забор пробы производится с изменением длины веревки. Так удается захватить и проверить разные слои озера или пруда. Содержимое фильтра, как правило, исследуется под микроскопом во влажном виде. Подобные способы позволяют выявлять все виды гельминтов. При обнаружении глистов, выявляется причина заражения, а также производится очистка.

Яйца гельминтов в сточных водах

Если вторичные сливы используются для орошения земли, они должны проходить очищение. Для этих целей могут быть использованы процессы, которые позволяют уничтожать яйца гельминтов. Как правило, наибольшую эффективность показывает седиментация или фильтрация отходов после их стабилизации в болотных экосистемах. Скорлупа яиц гельминтов очень прочна. Для того чтобы ее разрушить и убить глисты в зародыше, необходимо создать определенные условия. Хлорирование жидкостей, обработка их УФ светом или озоном, как показывает практика, малоэффективны. Лучший способ убить глистов в питьевой воде – нагреть ее до температуры выше +40 градусов по Цельсию, и держать такой уровень в течение длительного периода времени. Конечно, сформировать подобные условия для инактивации сливов довольно проблематично, для этого необходимо строить специальные очистительные системы. Но усилия и материальные траты сполна окупаются спокойствием и здоровьем людей. На бытовом уровне устранить глисты помогает обычное кипячение жидкости.

Важно помнить о том, что глисты в питьевой воде могут появиться при условии несоблюдения санитарных норм компаниями, обеспечивающими бесперебойную подачу жидкого носителя. В сточных сливах яйца гельминтов могут присутствовать, могут они быть и в унитазной воде, если для нужд канализации используются технические ресурсы.

Испражнения исследуются двумя методами:

1. Макроскопический – обнаруживают гельминтов, их головки, членики, обрывки стробилы. Небольшие порции кала, перемешивают с водой в плоской ванночке или чашке Петри и просматривают при хорошем освещении на темном фоне, при необходимости пользуясь лупой. Все подозрительные образования пинцетом переносят в другую чашку с водой или на предметное стекло в каплю разведенного глицерина.

При методе отстаивания исследуемую порцию фекалий размешивают с водой в стеклянном цилиндре, после отстаивания сливают верхний слой воды. Так повторяют несколько раз. Когда жидкость станет прозрачной ее сливают, а осадок просматривают в чашке Петри.

2. Микроскопический – для обнаружения яиц и личинок гельминтов. Существует много методов исследования.

1). Нативный мазок – наиболее распространенный и технически доступный метод исследования. Можно обнаружить яйца и личинки всех гельминтов. Однако, при небольшом количестве яиц их не всегда удается найти. Поэтому используется метод обогащения.

1). Метод Фюллеборга – это метод обогащения, основан на всплытии яиц гельминтозов в насыщенном растворе NaCl (1,2 – плотность; 400 г NaCl на 1 литр воды; 40% раствор NaCl). Метод более эффективен, чем нативный мазок. В стеклянные банки помещают 2-5 г фекалий и заливают раствором NaCl, размешивают и через 45 минут снимают образовавшуюся пленку металлической петлей, помещают каплю глицерина на предметное стекло. Исследуют под микроскопом. Недостаток метода – замедленное высплывание яиц различных гельминтов, карликовый цепень – через15-20 минут, аскарид – 1,5 часа, власоглав – 2-3 часа.

2) Метод Калантарян – также метод обогащения, но применяется насыщенный раствор NaNO 3 (1,38 плотность). Большинство яиц всплывает, не требуется исследования осадка. Недостаток – длительное выдерживание яиц в растворе, приводит к тому, что некоторые яйца начинают набухать и оседать на дно, исчезая с поверхностной пленки.

3. Метод Горячева – основан на принципе осаждения яиц, обнаружения мелких яиц трематод. В качестве раствора используют насыщенный раствор NaCl и сверху осторожно наслаивают 3-4 мл раствора фекалий. Через 15-20 часов яйца трематод оседают на дно. Жидкость сливают, осадок на предметное стекло и под микроскоп.

4. Метод закручивания по Шульману – для обнаружения в кале личинок гельминтов. Исследуют только свежевыделенные фекалии. 2-3 г помещают в стеклянную банку и приливают 5-кратное количество воды, быстро размешивают палочкой, не касаясь стенок банки – 20-30 минут, затем палочку быстро вынимают, и каплю жидкости на конце переносят на предметное стекло и микроскопируют.

5. Метод Бермана – основан на способности, личинок гельминтов мигрировать, по направлению к теплу, и служит для выявления их в фекалиях.

6. Метод Харада и Мори (метод выращивания личинок) и рекомендуется для исследования на анкилостомитозы. Метод основан на том, что в тепле и на влажной фильтрованной бумаге из яиц анкилостомид развиваются филяриевидные личинки, которые легко можно обнаружить. На середину полоски фильтрованной бумаги наносят 15 г кала, бумагу с фекалиями помещают в банку, так, чтобы нижний конец был погружен в воду, а верхний закреплен пробкой. Банку выдерживают в термостате 28 0 С в течение 5-6 дней. Филяриевидные личинки развиваются за это время и спускаются в воду. Жидкость исследуют под лупой. Если трудно обнаружить, жидкость центрифугируют, убив предварительно личинок нагреванием до 60 0 . Лаборант должен работать в перчатках.

7. Методы на энтеробиоз – выявление яиц острицы и бычьего цепня.

а) соскоб с перианальных складок – ватным тампоном, туго намотанным на деревянную палочку и смоченную 50% раствором глицерина. В лаборатории тампон смывают 1-2 каплями 50% водным раствором глицерина.

б) метод липкой лепты (метод Грэхэма)

Липкую ленту прикладывают к перианальным складкам, затем липким слоем к предметному стеклу и микроскопируют.

В) соскоб с помощью глазных палочек (метод Рабиновича). Для перианального соскоба используют стеклянные глазные палочки, широкая часть которых покрывается специальным клеем, что позволяет удерживать яйца остриц.

Исследование крови, желчи, мокроты и мышц

Микроскопия крови – обнаруживают личинки филярий.

Исследование мокроты – яйца параганима, личинки аскариды, некатора, стронгилоида, элементы эхинококкового пузыря.

Исследование мышц – при подозрении на трихинеллез исследуют мышцы больного или трупа, а также мясо, предположительно послужившего причиной заражения человека. С целью трихинеллоскопии мышцу разрезают на мелкие кусочки и помещают в компрессорий, это два широких, толстых стекла, которые раздавливают мышцы и личинки трихинеллы обнаруживаются в виде капсул – метод компрессии.

Метод переваривания – мышцы заливают искусственным желудочным соком (раствор соляной кислоты и пепсин). Мышцы перевариваются, а личинки легко выявляются. Определение интенсивности инвазии: количество личинок до 200 на 1 г мышечной ткани – умеренная интенсивность инвазии; до 500 – интенсивная; свыше 500 – сверхинтенсивная инвазия.

Серологические методы